テロメラーゼの細胞内局在と活性制御

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17390091
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 村上 清史 金沢大学, がん研究所, 教授 (90019878)
• 研究分担者: 善岡 克次 金沢大学, がん研究所, 教授 (60200937) ; 本多 政夫 金沢大学, 医学系研究科, 助教授 (00272980)
• キーワード: テロメラーゼ逆転写酵素(hTERT) / 組換え型テロメラーゼ / ヒト初代細胞 / HBV X蛋白 / 不死化 / がん化 / 膜型チロシンキナーゼ / 遺伝子発現

研究概要

テロメラーゼの発現はヒト初代細胞の不死化とがん化に必須であり、テロメラーゼは抗がん剤研究の有力な標的である。本年度の本課題研究で得られた成果は以下のように要約される。1)昆虫細胞発現の組換え型テロメラーゼの精製により、680kDa(PeakI)と380Kda(PeakII)の異なった複合体を分離精製した。PeakIIはテロメラーゼとHsp90が複合体を形成し、テロメラーゼ活性はHsp90阻害剤に感受性を示し、hTERTはプロテアソーム依存性に分解された。PeakIの活性はHsp90阻害剤の影響を受けず、安定な複合体として存在し、nucleolinと結合していることが示唆された。PeakIの複合体は、抗FLAG-hTERTを用いたaffinity精製が可能であることから、N端側が露出していると結論された。2)HeLa及びFLAG-hTERTの安定発現HeLa細胞から、同様にPeakI及びPeakIIのテロメラーゼ複合体を部分精製した。これらのテロメラーゼは、組換え型と類似した性質を示した。3)ヒト初代細胞と不死化細胞の解析でHBV X蛋白(HBx)はRASとの共存で不死化細胞を形質転換することを見出した。初代細胞と不死化細胞及びRAS+HBx導入細胞からmRNAを精製し、発現プロファイリングの検討を開始した。4)ヒト初代細胞と不死化細胞のがん化過程に果たすテロメラーゼ活性及び細胞増殖シグナル伝達との相互関連を検討するために、4種類の受容体チロシンキナーゼの発現プラスミドを作成した。そのうちEGF受容体については、膜貫通の活性化型分子であることを培養細胞系で確認した。さらに、同様の活性化型EGF受容体のレトロウイルス発現系を作製し、ヒト初代BJ細胞に導入した。EGF受容体は自己リン酸化型(活性化型)であったが、細胞の増殖と細胞の不死化に大きな影響を与えなかった。発現量の極めて低い安定発現株が選択された結果と推定された。

研究成果

• [雑誌論文] Effect of Hepatitis C Virus(HCV) NS5B-Nucleolin Interaction on HCV Replicon with HCV Subgenomic Replicon (2006)
  • 著者名/発表者名: Shimakami T et al.
  • 雑誌名: J Viol (印刷中)
• [雑誌論文] Selective expression of the scaffold protein JSAPI in spermatogonia and spermatocytes (2006)
  • 著者名/発表者名: Bayarsaikhan M et al.
  • 雑誌名: Reprodauction (印刷中)
• [雑誌論文] Control of granule cell precursor proliferation in the developing cerebellum and medulloblastoma. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yoshioka K., et al.
  • 雑誌名: Biomed Rev (印刷中)
• [雑誌論文] DNA-binding ability of RNA polymerase II subunit 5(RPB5). (2006)
  • 著者名/発表者名: Zhang S et al.
  • 雑誌名: Genes to Cells (投稿中)
• [雑誌論文] Transcriptional transactivation function of HBx protein is important for the augmentation role in Hepatitis B Virus replication. (2005)
  • 著者名/発表者名: Tang H et al.
  • 雑誌名: J Virol 79・9 ページ: 5548-5556
• [雑誌論文] The SIT4 gene, which encodes protein phosphatase 2, is reqired for telomere function in Sccharomyces cerevisiae. (2005)
  • 著者名/発表者名: Hayashi N et al.
  • 雑誌名: Current genetics 47 ページ: 359-367
• [雑誌論文] Mutational analysis of human RNA polymerase II subunit 5(RPB5) : the residues critical for interactions with TFIIF subunit RAP30 and Hepatitis B Virus X protein. (2005)
  • 著者名/発表者名: Le TTT et al.
  • 雑誌名: J Biochem (Tokyo) 138・3 ページ: 215-224
• [雑誌論文] Impairment of cardiomyogenesis in embryonic stem cells lacking scaffold protein JSAP1. (2005)
  • 著者名/発表者名: Sato T et al.
  • 雑誌名: Biochem.Biophys.Res.Commun. 338・2 ページ: 1152-1157
• [雑誌論文] Ephrin-A1 expression contributes to the malignant characteristics of (alpha)-fetoprotein producing hepatocellular carcinoma. (2005)
  • 著者名/発表者名: Iida H et al.
  • 雑誌名: Gut. 54・6 ページ: 843-851
• [雑誌論文] Differential gene expression profiles in stage I primary biliary cirrhosis. (2005)
  • 著者名/発表者名: Honda M et al.
  • 雑誌名: Am J Gastroenterol 100・9 ページ: 2019-2030
• [雑誌論文] Differential gene alteration among hepatoma cell lines demonstrated by cDNA microarray-based comparative genomic hybridization. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kawaguchi K et al.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 329・1 ページ: 370-380
• [雑誌論文] cDNA microarray analysis of autoimmune hepatitis, primary biliary cirrhosis and consecutive disease manifestation. (2005)
  • 著者名/発表者名: Honda M et al.
  • 雑誌名: J Autommun 25・2 ページ: 133-140
• [雑誌論文] La protein is a potent regulator of hepatitis C virus in patients with chronic hepatitis C through internal ribosomal entry site-directed translation. (2005)
  • 著者名/発表者名: Honda M et al.
  • 雑誌名: Gastroenterology 128・2 ページ: 449-462