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2017 年度 実施状況報告書

慢性炎症による大腸発癌に果たすドライバー遺伝子の決定

研究課題

研究課題/領域番号 17K08761
研究機関鳥取大学

研究代表者

岡田 太  鳥取大学, 医学部, 教授 (00250423)

研究期間 (年度) 2017-04-01 – 2020-03-31
キーワード炎症発癌 / ドライバー遺伝子 / 大腸発癌
研究実績の概要

散発性の大腸癌に対して炎症による大腸癌は,発癌に至る遺伝子変異等の導入の時期も順序も異なる.当該研究は大腸の炎症発癌における真のドライバー遺伝子の同定を目的に,マウスの腸管上皮組織をオルガノイド培養し,多段階発癌過程のどの遺伝子変化が炎症性の発癌と結び付くのかを検討した.炎症の誘発には急性炎症もしくは慢性炎症を惹起する異物を用いた.K-ras遺伝子変異とAPC遺伝子ノックダウンを組み合わせた雄マウス由来の腸管組織由来オルガノイドを雌のヌードマウスに生じさせた慢性炎症下に置くと移入直後より増殖することを検証した.また,p53遺伝子ホモ欠損マウスから得た腸管組織を慢性炎症下に置くと,移植後3ヶ月頃より増殖したが組織型はすべて線維肉腫であった.増殖腫瘍が移植した雄マウスの腸管組織に由来することをY染色体を指標に確認した.しかし,p53遺伝子ホモ欠損マウスから得た腸管組織を急性炎症下に置いても腫瘍増殖は観察されなかった.また,p53遺伝子ヘテロ欠損マウスの腸管組織では腫瘍増殖を観察することはできなかった.次年度の研究実施に向け,p53遺伝子ホモ欠損マウスから得た腸管組織由来のオルガノイドを共通の実験材料とするために,これを培養増殖させ保存を完了した.さらに,p53遺伝子ホモ欠損オルガノイドに導入する1)癌抑制遺伝子(DCC,APC, p53)のノックダウン用shRNA,2)COX-2遺伝子発現ベクター,3)癌遺伝子(K-ras)の活性化用にLoxP-Stop-LoxP-K-rasG12Dノックインマウスの腸管上皮からオルガノイドを作製した.上記の遺伝子発現改変用核酸のレンチウィルスを介した導入条件等の再検討と,目的通りに遺伝子が発現の抑制あるいは活性化・誘導を起こしていることを確認する予定である.

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

平成29年度の研究実施計画に則った計画実験をほぼ遂行し,当該研究の最大の関心である大腸の炎症発癌に関わるドライバー遺伝子として,p53遺伝子変異に加えてどのような遺伝子変異が必要であるのかを決定する候補遺伝子の発現改変用核酸の作製・準備を完了した.加えて,実験条件を極力整えることを目的として,使用する腸管オルガノイドは同一のものを大量に培養し保存も完了している.しかしながら,研究に使用予定であった活性化K-ras用のLoxP-Stop-LoxP-K-rasG12Dノックインマウスの系統維持が途絶えたことから,再現性を確認する際のことを想定し,現在凍結精子からの個体化を準備中である.少なくとも活性化K-rasの関与に係わる検証には,暫く時間を要するものと想定されるが,これ以外の当初予定していた癌抑制遺伝子群の関与は当初の予定通り平成30年度に遂行できる状況にある.

今後の研究の推進方策

若干の遅れはあるものの,概ね当初に予定していた検証ならびに確認を終え,実験材料等の準備がほぼ完了している.従って,当初の研究実施計画に従い,研究期間内に結論を得ることが可能な状況にあり,着実に遂行する予定である.

次年度使用額が生じた理由

目的の遺伝子発現が生じているか否かに関する検討が遅れたために,この解析に必要な物品費等の支出が行われずに次年度使用額を生じた.しかし,次年度中には当初計画のとおり実験を継続実施する予定であるため,増額分を含めて使用することになる.

  • 研究成果

    (11件)

すべて 2017 その他

すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (5件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Lysosome-associated membrane protein 2 (LAMP-2) expression induced by miR-194-5p down-regulation contributes to sunitinib resistance in human renal cell carcinoma cells.2017

    • 著者名/発表者名
      Yumioka T, Osaki M, Sasaki R, Yamaguchi N, Onuma K, Iwamoto H, Morizane S, Honda M, Takenaka A and Okada F.
    • 雑誌名

      Oncol Lett

      巻: 15 ページ: 893-900

    • DOI

      10.3892/ol.2017.7423

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Identification of microRNAs involved in resistance to Sunitinib in renal cell carcinoma cells.2017

    • 著者名/発表者名
      Yamaguchi N, Osaki M, Onuma K, Yumioka T, Iwamoto H, Sejima T, Kugoh H, Takenaka A and Okada F.
    • 雑誌名

      Anticancer Res

      巻: 37 ページ: 2985-2992

    • DOI

      10.21873/anticanres.11652

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Chemopreventive strategies for inflammation-related carcinogenesis: Current status and future direction.2017

    • 著者名/発表者名
      Kanda Y, Osaki M and Okada F.
    • 雑誌名

      Int J Mol Sci

      巻: 18 ページ: 867

    • DOI

      10.3390/ijms18040867

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Design, synthesis, and biological evaluation of a highly water-soluble psoralen-based photosensitizer.2017

    • 著者名/発表者名
      Uruma Y, Nonomura T, Yen PYM, Edatani M, Yamamoto R, Onuma K and Okada F.
    • 雑誌名

      Bioorgan Med Chem

      巻: 25 ページ: 2372-2377

    • DOI

      10.1016/j.bmc.2017.02.050

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Amigo2-upregulation in tumour cells facilitates their attachment to liver endothelial cells resulting in liver metastases.2017

    • 著者名/発表者名
      Kanda Y, Osaki M, Onuma K, Sonoda A, Kobayashi M, Hamada J, Nicolson GL, Ochiya T and Okada F.
    • 雑誌名

      Sci Rep

      巻: 7 ページ: 43567

    • DOI

      10.1038/srep43567

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] 肝転移に必要な新規分子の同定2017

    • 著者名/発表者名
      神田裕介,小沼邦重,園田彩奈,尾崎充彦,岡田 太
    • 学会等名
      第106回日本病理学会総会
  • [学会発表] がん予防基礎研究者が思う出口戦略2017

    • 著者名/発表者名
      岡田 太
    • 学会等名
      第24回日本がん予防学会総会
  • [学会発表] 肝転移のドライバー分子としてのAmigo2の同定2017

    • 著者名/発表者名
      神田裕介,小沼邦重,園田彩奈,濱田淳一,小林正伸,尾﨑充彦,岡田 太
    • 学会等名
      第26回日本がん転移学会学術集会・総会
  • [学会発表] 血管内皮細胞に発現するMTA1は血管新生阻害の標的分子となりうる2017

    • 著者名/発表者名
      石川瑞穂,尾﨑充彦,小沼邦重,神田裕介,岡田 太
    • 学会等名
      第26回日本がん転移学会学術集会・総会
  • [学会発表] MTA1 expressed in endothelial cells is a candidate target molecule for inhibiting angiogenesis2017

    • 著者名/発表者名
      石川瑞穂,尾﨑充彦,山岸 誠,岡田 太,遠藤英也
    • 学会等名
      第9回日本RNAi研究会・第4回日本細胞外小胞学会
  • [備考] 鳥取大学医学部病態生化学分野

    • URL

      https://byoutaiseikagaku.jimdo.com/

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公開日: 2018-12-17  

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