癌微小環境における癌関連線維芽細胞のRNA編集の意義と治療への応用

2018 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 17K16557
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 重安 邦俊 岡山大学, 医学部, 客員研究員 (70544071)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: RNA editing / 線維芽細胞 / 大腸癌 / 微小環境

研究実績の概要

１．癌関連線維芽細胞の免疫染色：大腸癌臨床検体において、癌関連線維芽細胞の免疫染色を行った。癌細胞のみならず、間質中の線維芽細胞と思われる紡錘型の細胞でもADAR1（RNA編集酵素）の発現上昇を認めており、癌微小環境中でのRNA編集の増加の可能性を示唆する内容であった。
２．大腸癌臨床検体でのRNA編集の解析：大腸癌臨床検体からRNAを抽出し、AZIN1のRNA編集を解析したところ、正常部よりも癌部での上昇を認めた。今年度はサンプル数を増やし解析してみたが、やはり同様の結果であった。免疫染色でのADAR1の発現上昇の結果合わせてみると、癌微小環境中では線維芽細胞においてもADAR1の発現が上昇しており、それに付随する形で、そのターゲットであるAZIN1のRNA編集が上昇しているものと思われた。
３．癌細胞の培養上清が線維芽細胞に及ぼす影響：癌細胞株の培養液を採取し線維芽細胞に反応させたところ、ADAR1の発現増加とAZIN1 RNA editingの上昇を認めた。ADAR1の発現上昇のメカニズムはまだはっきり解明できてはいないが、ADAR1がインターフェロン応答性の発現コントロールを受けていることから、何らかの液性因子の介在に伴う細胞間のクロストークが存在するものと思われる。
４．AZIN1 wild もしくはedited typeの発現プラスミドの導入：リポフェクション法を用い、AZIN1のwild もしくはedited typeの強制発現をin vitroで試みている。
また、現在までの内容で論文を作成した。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

臨床検体の解析をほぼ終了し、in vitroの実験も順調に推移しているため。

今後の研究の推進方策

WildもしくはEdited typeのAZIN1の強制発現を行い、機能解析を行う予定である。
このため、Wild typeのAZIN1とEdited typeのAZIN1の発現プラスミッドのトランスフェクションを開始している。

次年度使用額が生じた理由

AZIN1強制発現の実験を次年度に繰り越したため。

研究成果

• [雑誌論文] Activation of AZIN1 RNA editing is a novel mechanism that promotes invasive potential of cancer-associated fibroblasts in colorectal cancer (2019)
  • 著者名/発表者名: Takeda Sho、Shigeyasu Kunitoshi、Okugawa Yoshinaga、Yoshida Kazuhiro、Mori Yoshiko、Yano Shuya、Noma Kazuhiro、Umeda Yuzo、Kondo Yoshitaka、Kishimoto Hiroyuki、Teraishi Fuminori、Nagasaka Takeshi、Tazawa Hiroshi、Kagawa Shunsuke、Fujiwara Toshiyoshi、Goel Ajay
  • 雑誌名: Cancer Letters 巻: 444 ページ: 127～135
  • DOI: 10.1016/j.canlet.2018.12.009
  • 査読あり / 国際共著
• [学会発表] Activation of AZIN1 RNA editing facilitates and promotes invasive potential of cancer associated fibroblasts in colorectal cancer (2019)
  • 著者名/発表者名: Sho Takeda, Kunitoshi Shigeyasu, Yoshinaga Okugawa, Kazuhiro Yoshida, Yoshiko Mori, Shuya Yano, Kazuhiro Noma, Yuzo Umeda, Yoshitaka Kondo, Hiroyuki Kishimoto, Fuminori Teraishi, Hiroshi Tazawa, Shunsuke Kagawa, Ajay Goel, Toshiyoshi Fujiwara
  • 学会等名: AACR Annual Meeting 2019
  • 国際学会
• [学会発表] Novel evidence for AZIN1 RNA editing-mediated oncogenic role in colorectal cancer (2018)
  • 著者名/発表者名: Kunitoshi Shigeyasu, Ajay Goel, Toshiyoshi Fujiwara
  • 学会等名: JDDW 2018