レクチンマイクロアレイを用いた肝細胞癌の分化に関する糖鎖プロファイリング

2017 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 17K16572
• 研究機関: 大分大学
• 研究代表者: 高山 洋臣 大分大学, 医学部, 客員研究員 (50733614)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: 肝細胞癌 / レクチン / 糖鎖プロファイリング / 脱分化 / 糖転移酵素

研究実績の概要

糖鎖は生体の重要な構成成分であり、多くのタンパク質や脂質は、糖タンパク質や糖脂質となることで様々な生体機能を発揮するという重要な役割をもつ。様々な癌における糖鎖構造の変化が報告されており、当科でも様々な消化器癌における糖鎖の発現について調べてきた。
本研究では、肝細胞癌の中でも同一腫瘍内に分化度の異なる成分を有する症例について、糖鎖の発現プロファイリングを網羅的に行い、分化度間で比較検討することで、肝細胞癌の脱分化に関連のある因子を同定する。さらに機能解析し、それらをコントロールすることで、肝癌の新たな治療法の確立を目指す。
当科にて手術を行った肝細胞癌症例のホルマリン固定標本より組織を採取し、レクチンマイクロアレイ法による網羅的糖鎖解析を行った。対象は2006年1月から2015年12月までに当科で切除した、同一組織内に高分化型癌と中/低分化型癌の混在する症例で、当初70例を予定していたが、基準を満たした50症例について解析した。Laser captured microdissection(LCM)を用いて癌部から高分化成分、中分化成分を採取、蛋白抽出後Cy3にて蛍光標識し、網羅的糖鎖解析装置GlycoStationを用いて45種のレクチンについて発現を測定した。
分化度間で有意差を認めたのは、ConA、NPA、GNA、Calsepaの4種のレクチンで、高分化成分と比較し、中分化成分で有意に上昇していた。これらはいずれも高マンノース型糖鎖に結合するレクチンで、脱分化により高マンノース型糖鎖が増えることが示唆された。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

・２９年度の計画は、症例数が予定に達さなかったもののその他は概ね完了した。
・現在、有意差を認めたレクチンについてレクチン染色を行い、それに関連すると思われる糖転移酵素について免疫組織化学法で染色を進めているところである。

今後の研究の推進方策

前年度に行った実験で同定されたレクチンやそのレクチンに関連する蛋白、糖転移酵素などについて免疫組織化学染色を行い、発現部位や発現強度を調べる。高分化型癌、中/低分化型癌でそれぞれ高発現を呈するレクチン、蛋白、糖転移酵素などの発現を同定する。
また、同定されたレクチンやレクチンに関連する蛋白、糖転移酵素が、分化度や脱分化に関連するマーカーとなるか検証する。臨床病理学的因子(脈管侵襲, 単発/多発，腫瘍径，肝内転移, stage，再発,予後など)との関連を統計学的に検討する。これにより予後予測マーカーとしての有用性を検討する。

研究成果

• [学会発表] 肝細胞癌の脱分化に関わる糖鎖の同定-レクチンマイクロアレイを用いた網羅的解析- (2018)
  • 著者名/発表者名: 髙山 洋臣
  • 学会等名: 日本外科学会