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2018 年度 実施状況報告書

シングルアリル解析による転写シグナルのデジタル化及びインシリコ発生システムの構築

研究課題

研究課題/領域番号 17KT0108
研究機関京都大学

研究代表者

渡辺 亮  京都大学, iPS細胞研究所, 特定拠点助教 (60506765)

研究期間 (年度) 2017-07-18 – 2020-03-31
キーワードシングルセル / アリル特異的発現 / iPS細胞
研究実績の概要

本研究では、ヒトiPS細胞を用いて、シングルセルRNAシークエンスを実施し、そのSNP情報からアリル毎の遺伝子発現をシングルセルレベルで観察することを目的としている。今年度は前年度に行ったシングルセルRNAシークエンスのデータ解析、及びその結果の論文投稿を行った。
まず、ヒトiPS細胞と繊維芽細胞に対して、シングルセルレベルでのアリル特異的発現を1000以上の遺伝子に対して実施した。そして、これらの細胞間で異なったアリル特異的発現を検出し、その共通性または相違性を検証した。細胞集団を対称としたバルクのRNAシークエンスでは、多くの遺伝子が両アリルからの発現(バイアリル発現)を示していた。シングルセルRNAシークエンスでは、解析可能な遺伝子の多くはモノアリル発現を示し、発現されているアリルは個々の細胞によって異なっていた。各遺伝子の使用アリル情報について、各細胞の平均を取ったところ、バイアリル発現となった。これらの結果は、これまでバイアリル発現であると考えられてきた多くの遺伝子は、一細胞レベルでは片側のアリルから発現していることを示唆している。一部の細胞では解析した多くの細胞で同じアリルから発現される安定型モノアリル発現、または多くの細胞で両アリルから発現する安定型両アリル発現を示す遺伝子が観察された。これらの遺伝子の使用するアリルの傾向は繊維芽細胞とiPS細胞で大きな違いは見られず、また既報にあるインプリンティング遺伝子が必ずしも安定型モノアリル発現を示しているわけではないことが示された。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

1: 当初の計画以上に進展している

理由

今年度は、ヒトiPS細胞及びそのオリジンである繊維芽細胞にについて、全ゲノムDNAシークエンスおよびシングルセル遺伝子発現解析を行うことで、シングルセルレベルでのアリル特異的発現を1000以上の遺伝子に対して実施した。その結果、解析可能な遺伝子の多くはモノアリル発現を示し、発現されているアリルは個々の細胞によって異なっていた。各遺伝子の使用アリル情報について、各細胞の平均を取ったところ、バイアリル発現となった。これらの結果は、これまでバイアリル発現であると考えられてきた多くの遺伝子は、一細胞レベルでは片側のアリルから発現していることを示唆していた。今年度はその結果を論文にまとめて投稿したことから当初の予定以上に進捗していると判断した。

今後の研究の推進方策

次年度は、これまでに実施したアリル特異的遺伝子発現のバイオインフォマティクス解析のパイプラインの改良を行うと共に、DNAメチル化との関係を調べることで、アリル特異的発現の分子メカニズムに迫る。

次年度使用額が生じた理由

今年度はデータ解析を中心に行ったため、その解析を担当する研究員の人件費を中心に予算を執行した。次年度は、今年度実施できなかったシングルセル遺伝子発現解析を計画しているため、繰り越すこととした。

  • 研究成果

    (16件)

すべて 2019 2018

すべて 雑誌論文 (8件) 学会発表 (8件) (うち国際学会 1件、 招待講演 3件)

  • [雑誌論文] Induced Pluripotent Stem Cells and Their Use in Human Models of Disease and Development.2019

    • 著者名/発表者名
      Karagiannis P, Takahashi K, Saito M, Yoshida Y, Okita K, Watanabe A, Inoue H, Yamashita JK, Todani M, Nakagawa M, Osawa M, Yashiro Y, Yamanaka S, Osafune K.
    • 雑誌名

      Physiol Rev

      巻: 99 ページ: 78-114

    • DOI

      10.1152/physrev.00039.2017.

  • [雑誌論文] シングルセルゲノミクスによる細胞個性の解析が展開する免疫学研究.2019

    • 著者名/発表者名
      坂本智子、渡辺亮
    • 雑誌名

      臨床免疫・アレルギー科,

      巻: 71 ページ: 448-454

  • [雑誌論文] Enhancing T Cell Receptor Stability in Rejuvenated iPSC-Derived T Cells Improves Their Use in Cancer Immunotherapy.2018

    • 著者名/発表者名
      Minagawa A, Yoshikawa T, Yasukawa M, Hotta A, Kunitomo M, Iriguchi S, Takiguchi M, Kassai Y, Imai E, Yasui Y, Kawai Y, Zhang R, Uemura Y, Miyoshi H, Nakanishi M, Watanabe A, Hayashi A, Kawana K, Fujii T, Nakatsura T, Kaneko S.
    • 雑誌名

      Cell Stem Cell

      巻: 23 ページ: 850-858

    • DOI

      10.1016/j.stem.2018.10.005.

  • [雑誌論文] Integration Capacity of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cartilage.2018

    • 著者名/発表者名
      Chen X, Yamashita A, Morioka M, Senba T, Kamatani T, Watanabe A, Kosai A, Tsumaki N.
    • 雑誌名

      Tissue Eng Part A,

      巻: 25 ページ: 437-445

    • DOI

      10.1089/ten.TEA.2018.0133

  • [雑誌論文] Generation of HIV-Resistant Macrophages from IPSCs by Using Transcriptional Gene Silencing and Promoter-Targeted RNA.2018

    • 著者名/発表者名
      Higaki K, Hirao M, Kawana-Tachikawa A, Iriguchi S, Kumagai A, Ueda N, Bo W, Kamibayashi S, Watanabe A, Nakauchi H, Suzuki K, Kaneko S.
    • 雑誌名

      Mol Ther Nucleic Acids

      巻: 12 ページ: 723-804

    • DOI

      10.1016/j.omtn.2018.07.017

  • [雑誌論文] Generation of TCR-Expressing Innate Lymphoid-like Helper Cells that Induce Cytotoxic T Cell-Mediated Anti-leukemic Cell Response.2018

    • 著者名/発表者名
      Ueda N, Uemura Y, Zhang R, Kitayama S, Iriguchi S, Kawai Y, Yasui Y, Tatsumi M, Ueda T, Liu TY, Mizoro Y, Okada C, Watanabe A, Nakanishi M, Senju S, Nishimura Y, Kuzushima K, Kiyoi H, Naoe T, Kaneko S.
    • 雑誌名

      Stem Cell Reports

      巻: 10 ページ: 1935-1946.

    • DOI

      10.1016/j.stemcr.2018.04.025

  • [雑誌論文] MYC Releases Early Reprogrammed Human Cells from Proliferation Pause via Retinoblastoma Protein Inhibition.2018

    • 著者名/発表者名
      Rand TA, Sutou K, Tanabe K, Jeong D, Nomura M, Kitaoka F, Tomoda E, Narita M, Nakamura M, Nakamura M, Watanabe A, Rulifson E, Yamanaka S, Takahashi K.
    • 雑誌名

      Cell Rep.

      巻: 23 ページ: 361-375.

    • DOI

      10.1016/j.celrep.2018.03.057

  • [雑誌論文] 細胞運命決定機構を明らかにするシングルセル遺伝子発現解析.2018

    • 著者名/発表者名
      坂本智子、前伸一、長船健二、岡田千尋、樺井良太朗、渡辺亮.
    • 雑誌名

      日本薬理学雑誌

      巻: 153 ページ: 61-66

  • [学会発表] Epigenetic Landscape in Multi-step Leukemogenesis in Down Syndrome.2018

    • 著者名/発表者名
      Akira Watanabe
    • 学会等名
      International Symposium on Epigenome 2019
    • 国際学会
  • [学会発表] シングルセル遺伝子発現解析が変える生命科学.2018

    • 著者名/発表者名
      渡辺亮
    • 学会等名
      第41回 分子生物学会 年会
  • [学会発表] Epigenetic Dysregulation is a Key Signature in Multi-step Leukemogenesis in Down Syndrome.2018

    • 著者名/発表者名
      Akira Watanabe
    • 学会等名
      第80回 日本血液学会 学術総会.
  • [学会発表] 腫瘍学及び再生医療に応用されるシングルセルマルチオミックス2018

    • 著者名/発表者名
      渡辺亮
    • 学会等名
      第77回 日本癌学会 学術総会.
    • 招待講演
  • [学会発表] シングルセル遺伝子発現解析で迫る細胞運命決定機構2018

    • 著者名/発表者名
      渡辺亮
    • 学会等名
      生命医薬情報学連合大会2018.
    • 招待講演
  • [学会発表] 膵臓の再生を明らかにするシングルセル遺伝子発現及びマルチオミックス解析.2018

    • 著者名/発表者名
      渡辺亮
    • 学会等名
      第61回日本糖尿病学会 年次学術集会.
    • 招待講演
  • [学会発表] Challenge to Regeneration of Hair Cells in the Cochlea Sensory Epithelia by Single Cell Transcriptomics.2018

    • 著者名/発表者名
      喜多 知子、坂本 智子、松永 麻美、長谷川 晶子、岡田 千尋、中川 隆之、渡辺 亮.
    • 学会等名
      Challenge to Regeneration of Hair Cells in the Cochlea Sensory Epithelia by Single Cell Transcriptomics.第41回 分子生物学会 年会.
  • [学会発表] 膵臓の再生を明らかにするシングルセル遺伝子発現解析.2018

    • 著者名/発表者名
      坂本 智子、龍岡 久登、矢部 大介、稲垣 暢也、渡辺 亮.
    • 学会等名
      第41回 分子生物学会 年会

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公開日: 2019-12-27  

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