| 研究概要 |
チロシンキナーゼ型受容体を起点とする細胞内情報伝達経路に含まれ、脂質膜中のリン酸化イノシトールリン脂質の認識、結合を介して、下流に位置するRacの活性化を行うPIP3(ホスファチジルイノシトール3,4,5-三リン酸)結合蛋白質SWAP-70の脂質膜結合機構を分光学的手法により構造レベルで解析し、PIP3認識、Rac活性化の機構を明らかにすることを目的として研究を進行している。分光学的構造解析の準備として、SWAP-70のPIP3認識、結合を支配すると考えられるPHドメイン部位(209-306)および脂質膜結合能が野生型とは異なる変異PHドメイン(K219A/K220A,E245A/D246A,K271A/K272A)について、大腸菌を用いた大量発現系を用意し、固体NMR分光法、共鳴ラマン分光法等に用いうる安定同位体標識蛋白質の発現条件の確立と蛋白質試料の調製を行った。同時に、脂質-蛋白質結合部位の構造および結合機構が静的な状態で明らかになっているホスホリパーゼC-δ1について、SWAP-70PHドメインの分光スペクトル解析の基準を得ることおよび、脂質膜組成および膜構造が変化しうる動的な状態におけるPHドメインの膜結合状態に関する知見を得ることを目的として、異なる脂質組成の脂質膜ベシクル中のPIP2に結合した際の蛋白質構造変化を固体NMR分光法を用いて解析し、報告した。また、ラマン分光法による時間分解測定を用い、基質結合部位の動的構造を追跡するために、イノシトールリン脂質を対象として、ラマン分光法による解析の条件検討を行った。
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