研究課題
2020年度はネオ抗原を標的として研究を行った。2019年度に構築したTAP (Transcriptionally active PCR) fragmentとJurkat Δαβ hCD8αを用いたTCR機能解析系を用いて、大腸がんの腫瘍浸潤リンパ球(TIL)由来のTCR遺伝子の中からネオ抗原候補に反応するTCRのスクリーニングを行った。【方法】（1）TCR cDNAは、TIL中のPD-1+ CD137+ CD8+ T細胞を単一細胞ソーティングし、RT-PCR法により増幅した。（2）TCRのTAP fragmentは、TCR cDNA断片に遺伝子発現に必要なDNAをGibson assembly法で連結させた後、PCRにより増幅することで作製した。（3）ネオ抗原解析は、腫瘍のDNAおよびRNAのNGS解析により選定した。そして、候補抗原を連結したTMGを作製した。（4）ターゲット細胞（HLA-TMG-MCF7）は、患者HLA発現プラスミドとTMG発現プラスミドを、CRISPR/Cas9でHLA-Class-I をノックアウトしたMCF7細胞へ遺伝子導入して作製した。（5）エフェクター細胞（TCR-Jurkat）は、TCRのTAP fragmentとNFAT-LuciferaseレポータープラスミドをエレクトロポレーションによりJurkatΔαβ hCD8α細胞へ遺伝子導入して作製した。（6）TCRのネオ抗原反応性の解析は、HLA-TMG-MCF7とTCR-Jurkatを一晩共培養後、Luciferaseアッセイにより解析した。【結果】これまでに2名の大腸がん患者のTIL得られた33種類と38種類のTCRいついて、ネオ抗原TMG(40と22種類の変異ペプチド)に対する反応性を網羅的に解析した。その結果、2名の患者からネオ抗原TMGに反応する複数のTCRの同定に成功した。
すべて 2020
すべて 学会発表 (1件)
