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我々はこれまでに角膜上皮の幹細胞と幹細胞を維持する環境であるニッシェを分離し、オルガノイド培養法を用いることで長期培養を可能としてきた。これにより、輪部機能不全を伴った難治性の疾患に対する適応の拡大が期待される。本研究ではさらに再生医療として現実性を高めるため、すでに化粧品や医薬としても利用されているメチルセルロースを用いて、オルガノイドのさらなる長期維持培養法の確立を目指している。昨年度においてはメチルセルロースにコラーゲン並びにES細胞等を培養時に効果的なラミニン５１１を添加することによるオルガノイド形成の培養条件の改善を検討してきた。コラーゲンラミニン５１１添加することにより、オルガノイド形成にある程度効果があることがわかったが、それ以上の効果は観察されなかったため、現在別条件での効果について観察中である。メチルセルロースにおいて作成したオルガノイドはマトリゲルおいて作成したオルガノイドと比較して構造的に異なっていることがわかってきた。マトリゲルで作成したオルガノイドでは周辺部に基底膜を作成しその周辺部に比較的未分化な細胞が存在していたのに対し、メチルセルロースで作成したオルガノイドでは中央付近で基底膜を作成しその中央付近で比較的未分化な細胞が存在していることがわかった。これにより、幹細胞を維持するニッシェはメチルセルロースで作成すると比較的中央部分に存在して維持されている可能性が考えられた。今後においてはさらに向上したオルガノイドの培養法について検討並びに解析を行うと共に、オルガノイドの保存法並びに移植法についても検討していく予定である。
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