酵素学的定量法を用いた新規の食品中ビタミンB12分析法の開発

2020 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 18K14431
• 研究種目: 若手研究
• 配分区分: 基金
• 審査区分: 小区分38050:食品科学関連
• 研究機関: 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所
• 研究代表者: 鈴木 一平 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所, 国立健康・栄養研究所 食品保健機能研究部, 研究員 (00812439)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: ビタミンB12 / リボヌクレオチドリダクターゼ / Lactobacillus / 微生物学的定量法 / 酵素学的定量法 / 乳酸菌

研究成果の概要

食品中のビタミンB12 (VB12) を酵素活性を指標にすることで簡易に定量する方法の開発を目的に研究を遂行した。VB12を補酵素として要求するRibonucleoside triphosphate reductase (RNR)について検討した。His-tagを付与したリコンビナントRNR (reHis-RNR) の精製を行った。LC-MSを用いて反応産物であるdNTPの産生量を活性指標とした。この結果食品中のVB12を簡便に測定するためにはreHis-RNR反応条件のさらなる最適化が必要であるものの、reHis-RNR活性をVB12濃度測定の指標とする事は一定の妥当性があると考えられた。

自由記述の分野

食品分析

研究成果の学術的意義や社会的意義

乳酸菌由来ビタミンB12依存性リボヌクレオチドリダクターゼの大量発現系を構築するとともに、DNAシークエンス解析によって、変異個所を明らかにした。LC-MSを用いてリボヌクレオチドリダクターゼの反応産物であるdNTPの産生量を活性指標とした測定法を検討した結果、VB12を簡便に測定するためにはreHis-RNR反応条件のさらなる最適化が必要であるものの、より簡便なVB12測定法の開発に繋がると期待された。