無細胞系分子ディスプレイシステムの構築と応用

2010 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19360373
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物機能・バイオプロセス
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 中野 秀雄 名古屋大学, 生命農学研究科, 教授 (00237348)
• 研究分担者: 岩崎 雄吾 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 准教授 (50273214) ; 兒島 孝明 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 助教 (40509080)
• 連携研究者: 中嶋 光敏 筑波大学, 大学院・生命環境科学研究科, 教授 (10343815)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2010
• キーワード: エマルジョンPCR / 無細胞タンパク質合成系 / マイクロチャネル乳化ペプチド / ビーズディスプレイ

研究概要

DNAをマイクロビーズ上にエマルジョンPCRを用いて提示し、さらにそれがコードするペプチドおよび蛋白質を同じビーズ上に提示させる、新規な無細胞系分子ディスプレイシステムを開発した。この手法はフローサイトメーターを用いた高速なスクリーニングに適応可能である。例としてペプチドの進化工学、酵素のハイスループットスクリーニング、転写因子結合配列の解析に応用し、その有効性を実証した。

研究成果

• [雑誌論文] Analysis of DNA-Protein Interaction Analysis. (2011)
  • 著者名/発表者名: Kojima, T., Nakano, H.GLOBE
  • 雑誌名: PCR Protocols, Methods in Molecular Biology J. Park (ed.) 687 ページ: 307-317
• [雑誌論文] High-throughput Screening of DNA Binding Sites for Transcription Factor AmyR from Aspergillus nidulans Using DNA Beads Display System. (2010)
  • 著者名/発表者名: Kojima, T., Hashimoto, Y., Kato, M., Kobayashi, T., Nakano, H.
  • 雑誌名: J.Biosci.Bioeng. 109 ページ: 519-512
  • 査読あり
• [雑誌論文] Directed Evolution of Angiotensin II-inhibiting Peptides Using Microbeads Display. (2010)
  • 著者名/発表者名: Gan, R., Furuzawa, S., Kojima, T., Kanie, K., Kato, R., Okochi, M., Honda, H., Nakano, H.
  • 雑誌名: J.Biosci.Bioeng. 109 ページ: 411-417
  • 査読あり
• [雑誌論文] Microbeads Display of Proteins Using Emulsion PCR and Cell-Free Protein (2008)
  • 著者名/発表者名: Rui Gan, Yumiko Yamanaka, Takaaki Kojima, Hideo Nakano
  • 雑誌名: Synthesis.Biotechnol.Prog. 24 ページ: 1107-1114
  • 査読あり
• [学会発表] ビーズディスプレイ法におけるDNA-蛋白質複合体の安定化 (2010)
  • 著者名/発表者名: 三上友美子、松田英樹、松井大悟、見島孝明、中野秀雄
  • 学会等名: 日本生物工学会2010年62回大会
  • 発表場所: 宮崎
  • 年月日: 20101000
• [学会発表] Beads display : A Novel High-throughput Screening Technology to Explore Functional Biomolecules. (2010)
  • 著者名/発表者名: 見島孝明, 中野秀雄
  • 学会等名: The Eleventh China-Japan-Korea Joint Symposium on Enzyme Engineering
  • 発表場所: Chengdu, China
  • 年月日: 2010-11-06
• [学会発表] Bead Display : A High-throughput Screening Technology of Functional Proteins and DNAs (2010)
  • 著者名/発表者名: 中野秀雄
  • 学会等名: International Symposium, Annual Meeting of The Korean Society for Microbiology and Biotechnology
  • 発表場所: 韓国 ソウル
  • 年月日: 2010-06-25
• [学会発表] DNAのビーズディスプレイ法を用いたDNA-酵母転写因子相互作用検出システム (2009)
  • 著者名/発表者名: 王ハン輝、見島孝明、中野秀雄
  • 学会等名: 日本生物工学会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2009-09-22
• [学会発表] エマルジョン培養法による分泌酵素産生菌の選択的濃縮 (2009)
  • 著者名/発表者名: 長尾伸人、安東大介、小島晃代、河原崎泰昌、見島孝明、中野秀雄
  • 学会等名: 日本生物工学会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2009-09-22
• [学会発表] ビーズディスプレイ法を用いたリパーゼのハイスループットスクリーニング法の開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 松井大悟、浅賀由香理、甘睿、兒島孝明、中野秀雄
  • 学会等名: 日本生物工学会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2009-09-22
• [学会発表] High-throughput Screening of DNA Binding Sites for Transcription Factor, AmyR, from Aspergillus nidulans Using Beads Display System of DNA. (2008)
  • 著者名/発表者名: 見島孝明, 橋本陽子, 加藤雅士, 小林哲夫, 中野秀雄
  • 学会等名: 4th Korea-Japan Workshop on Combinatorial Bioengineering
  • 発表場所: Seoul
  • 年月日: 20081100
• [学会発表] DNAのビーズディスプレイ法を用いたDNA-転写因子問相互作用検出法 (2008)
  • 著者名/発表者名: 見島孝明, 橋本陽子、加藤雅士、小林哲夫、中野秀雄
  • 学会等名: 日本生物工学会平成20年度大会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 20080800
• [学会発表] Genotype-Phenotype Coupling Screening of DNA (2008)
  • 著者名/発表者名: Rui GAN, Yumiko YAMANAKA, Hideo NAKANO
  • 学会等名: Molecules Displayed on Microbeads by Using Cell-free Protein Synthesis Biocat2008
  • 発表場所: ハンブルグ、ドイツ
  • 年月日: 2008-09-03
• [学会発表] 無細胞蛋白質合成系を用いたマイクロビーズ上での分子ディスプレイ法の開発 (2008)
  • 著者名/発表者名: 古澤聖司, Rui GAN、中野秀雄
  • 学会等名: 日本農芸化学会2008年度大会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2008-03-27
• [学会発表] Microbeads Display of Proteins Using Emulsion PCR and Cell-free Protein Synthesis (2008)
  • 著者名/発表者名: Rui GAN, Yumiko YAMANAKA, Hideo NAKANO
  • 学会等名: 日本農芸化学会2008年度大会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2008-03-27
• [学会発表] DNAのビーズディスプレイ法を用いたDNA転写因子問相互作用検出法 (2007)
  • 著者名/発表者名: 橋本陽子、見島孝明、加藤雅士、小林哲夫、中野秀雄
  • 学会等名: 日本生物工学会平成19年度大会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 2007-09-26
• [産業財産権] 分子ディスプレイ法およびその用途 (2008)
  • 発明者名: 中野秀雄古澤聖司
  • 権利者名: 国立大学法人名古屋大学
  • 産業財産権番号: 特許,特願2008-018324
  • 出願年月日: 2008-01-29