近接位で協同的にはたらくバイナリーアプタマーの合理的取得とその自在なプローブ化

2021 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19K05545
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 審査区分: 小区分34020:分析化学関連
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 北村 裕介 熊本大学, 大学院先端科学研究部(工), 助教 (80433019)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: 核酸 / アプタマー / 分子協働性 / バイオセンサー / PD-L1 / がん免疫療法

研究成果の概要

腫瘍細胞の細胞膜上に高発現している膜タンパク質であるPD-L1を標的とした。まず、1.0E+12の多様性を有する初期DNAライブラリーの中からPD-L1に結合するものだけを通常のSELEX法にて選択した(予備選択)。予備選択を終えたライブラリーをPCRにより増幅する際、5’末端にアントラセンを修飾したフォワードプライマーを用いることで、アントラセン修飾ライブラリー(Ant-Lib)を得た。このライブラリーを用い、3’末端にアントラセンを修飾した既知の抗PD-L1アプタマー(プライマリーアプ タマー)に対して近接結合するアプタマーの選択（Proximity SELEX）を行った。

自由記述の分野

核酸化学、分析化学

研究成果の学術的意義や社会的意義

近接位選択を10ラウンドを終えている。最終的に得らえたライブラリーをベクターに組み込み、大腸菌にトランスフェクションし、得られたコロニーから回収したベクターの配列をサンガーシーケンシング法により配列を解読する予定である。近接位に結合可能なセカンダリーアプタマーが取得できていた場合、他のアプタマーにおいても同様にセカンダリーアプタマーを取得することによってバイナリー化が可能であると考えられ、既存のアプタマーの機能や性能を自在に拡張、改変可能な汎用の手法となることが期待される。