ファージディスプレイ法は標的分子と結合するペプチド配列を探索する優れた手法である。しかし、単離・精製が困難な膜蛋白質に適用が困難という大きな課題が残されていた。そこで、筆者はファージにNi錯体を化学修飾することで、細胞表層に発現するHis-tag融合蛋白質に選択的なリガンド探索ができると考えた。まず、ファージに対する化学修飾反応を確立するため、蛍光色素NBDを用いて反応条件を確立した。この結果をもとにNi錯体をファージに修飾し、His-tag融合hDM2に対してペプチドリガンドの探索を行った。その結果、Ni錯体を修飾した場合、有意に標的蛋白質と結合するファージが濃縮されることが明らかとなった。
|