乳癌におけるCRISPRゲノム編集によるCDK4/6阻害剤の網羅的耐性機序の解明

2021 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 20K17592
• 研究種目: 若手研究
• 配分区分: 基金
• 審査区分: 小区分55010:外科学一般および小児外科学関連
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 永山 愛子 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 助教 (00573396)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: 乳癌 / ゲノム編集 / CRISPR/Cas9 / CDK4/6阻害剤 / 細胞周期

研究成果の概要

ホルモン受容体陽性乳癌のモデルMCF7を用い、Cas9を導入し、その安定発現と酵素活性を確認した。Whole genome knockout libraryを用いてCRISPR/Cas9によるゲノム編集を行った細胞とCDK4/6阻害剤の一種であるpalbociclibとの共培養を約2週間行った。最終産物の細胞からgDNAを抽出し、各sgRNAに付随するバーコードをPCRで増幅させ、NGSによる解析を行った。現在は解析結果確認中であるが、既報にて確認されているRbのノックアウト株が細胞増殖を認めるなど耐性候補遺伝子同定のアッセイが機能したことを示唆する結果が確認されている。

自由記述の分野

乳癌

研究成果の学術的意義や社会的意義

本研究はHR陽性乳癌におけるサイクリン依存性キナーゼ（CDK）4/6阻害剤の耐性遺伝子を同定することを目的とする。近年、内分泌療法とCDK4/6阻害剤の併用が無増悪生存期間の延長を示し、標準治療となった。しかし、薬剤耐性の発現と腫瘍再増大が臨床上の問題となっている。そこで、CRISPR/Cas9のゲノム編集技術を用いてWhole-genome knockout screenを行うことで耐性遺伝子を網羅的に探索し、癌細胞におけるCDK4/6阻害剤耐性の原理を明らかにする。本研究の手法を用いることで、新規耐性遺伝子を発見し、薬剤耐性克服の一助となる知見を得ることが可能と考えられる。