| 研究課題/領域番号 |
20K19655
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| 研究機関 | 金城学院大学 |
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研究代表者 |
北村 祐貴 金城学院大学, 薬学部, 助教 (80802553)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | サルナシ / パーキンソン病 / 2D-DIGE / カルボニル化タンパク質 |
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| 研究実績の概要 |
パーキンソン病は、ドパミン作動性神経細胞の減少や消失による振戦、筋固縮、運動緩徐、姿勢反射障害などの運動機能障害を特徴とする進行性の神経変性疾患である。パーキンソン病の発症原因は未だ解明されていないが、活性酸素種による酸化ストレスの増大がタンパク質に酸化的損傷を誘導し、ドパミン作動性神経細胞の細胞死を引き起こすことが発症に関わると考えられている。
これまでに、抗酸化作用を持つサルナシ(Actinidia arguta)の果汁摂取が、1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP)誘導型パーキンソン病モデルマウスにおいて、MPTPが誘発する運動機能障害およびドパミン作動性神経細胞数の減少を抑制することを明らかにした。
本年度は、サルナシ果汁によるパーキンソン病の発症予防に関与するタンパク質を明らかにするために、二次元電気泳動法によるプロテオミクス解析を行った。モデルマウスの中脳黒質組織からタンパク質を抽出し、蛍光色素にて標識後、蛍光標識二次元ディファレンスゲル電気泳動(2D-DIGE)法により、タンパク質の発現量変動を網羅的に解析した。有意な変動が認められたタンパク質スポットについて、スポットからペプチドを抽出し、質量分析装置(MALDI-TOF/TOF-MS)を使用することでタンパク質を同定した。さらに、免疫沈降法と酸化損傷タンパク質を検出するウェスタブロット法を組み合わせることで、サルナシ果汁によるタンパク質の酸化的損傷への影響について検討した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、2D-DIGE法を用いた中脳黒質組織におけるタンパク質の網羅的発現量解析を行った。その結果、MPTP投与により発現量が変動したタンパク質やサルナシ果汁摂取によりMPTPが誘導した発現量変動が抑制されたタンパク質を同定した。今後は同定したタンパク質の抗体を用いたウェスタンブロッティング法により定量解析を行い、サルナシ果汁によるパーキンソン病の発症予防の分子メカニズムを明らかにしていく。また、タンパク質の酸化的損傷の一つであるカルボニル化を検出する抗体キットの代替品を新たに検討する必要があったため、免疫沈降法のプロトコルの修正も含めた条件検討の実験を行った。
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| 今後の研究の推進方策 |
引き続き、同定したタンパク質の抗体を用いたウェスタンブロッティング法による定量解析実験を行う。また、免疫沈降法を用いたカルボニル化タンパク質の解析に着手し、酸化的損傷に対するサルナシ果汁の効果を検証する。さらに、サルナシ果汁からドパミン作動性神経細胞死を抑制できる有効物質を精製する実験に着手する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
定量解析実験で使用する同定したタンパク質を検出する抗体は輸入品や受注生産品の製品があり、年度をまたいで納品される可能性があったため、その費用分等を次年度に繰り越した。
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