血清中血管内皮リパーゼ酵素活性の測定法確立と血清HDL値の関連の解明

2011 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 21590897
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 循環器内科学
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 石田 達郎 神戸大学, 医学部附属病院, 准教授 (00379413)
• 研究分担者: 平田 健一 神戸大学, 大学院・医学研究科, 教授 (20283880)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• キーワード: 脂質代謝 / 循環器 / 血管内皮 / リポ蛋白代謝 / リパーゼ / 脂質異常症

研究概要

高比重リポ蛋白コレステロール(HDL-C)は、動脈硬化の負の危険因子である。しかし、血清HDL-C値の制御機構は十分に明らにされていない。近年同定された新規の脂質代謝酵素である血管内皮リパーゼ(Endothelial lipase ; EL)は血清HDL値の主要な規定因子である。本研究は、血清EL活性.蛋白量と血清HDL値との関係を明らかにすること、また冠動脈疾患の発症におけるHDL値とELとの関係を解析することを目指した。
我々は、これまでヒト血清EL蛋白濃度を測定するELISAを用いて血清EL濃度と血清HDL. C濃度との関係を検討してきた。本課題研究では、新規の抗ELモノクロナル抗体を作製し、血清中EL蛋白量を定量するためのELISAをさらに改良した。新規のELISAではヒトEL血中濃度は319. 9±9. 0(74. 6.～1193. 7) pg/mLと既報より2桁低値を示した。ヒト血清EL濃度と血清HDL-C値との関係を検討したところ、血清EL濃度は血清HDL-C値と有意な逆相関関係を示したが、血清LDL-C濃度や中性脂肪濃度とは関連がなかった。また、冠動脈疾患患者は、非冠動脈疾患患者と比較して血清EL濃度が上昇しており、血清HDL-C値が低値であった。さらに、ヘパリン投与前後でELの蛋白量に変化はなかった。ELは血管内皮細胞から分泌された後、血管内宮側にヘパラン硫酸プロテオグリカンを介して係留していると推察されてきたが、ELとプロテオグリカンの相互作用やヘパリンによる遊離の有無については、再検討が必要であると考えられた。
また、新規に作成した抗EL抗体で血清を免疫沈降した後に、その活性を蛍光標識した合成リン脂質Bis-BODIPY FL C11-PCを基質として測定する系を独自に開発した。ヒト血中EL活性と血清HDL-C値との関係を検討したところ、EL活性は血清HDL-C値と有意な逆相関関係を示したが、血清LDL-C濃度や中性脂肪濃度とは関連がなかった。また、冠動脈疾患患者は、非冠動脈疾患患者と比較して血清EL活性が上昇しているとともに高感度CRPが高値で、血清HDL-C値が低値であった。血清EL活性は冠危険因子と正の相関を示した。ただし、EL蛋白量と活性は有意な相関は示さず、これは血清中のELには不活性型が多いのかなどを含めて更なる検討が必要であると考えられた。
結論として、我々はヒト血清EL蛋白濃度および活性の測定系を独自に確立した。ヒト血中EL濃度および活性は、血清HDL-C値の制御因子であるとともに、冠動脈硬化のマーカーであることが明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] The Effect of Poloxamer 407 on the Functional Properties of HDL In Mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Yasuda T, Johnston TP, Shinohara M, Inoue M, Ishida T
  • 雑誌名: Pharm Pharmacol 巻: 64(5) ページ: 677-87
• [雑誌論文] Endothelial lipase mediates hdl levels in normal and hyperlipidemic rabbits (2012)
  • 著者名/発表者名: Zhang J, Yu Y, Nakamura K, Koike T, Waqar AB, Zhang X, Liu E, Nishijima K, Kitajima S, Shiomi M, Qi Z, Yu J, Graham MJ, Crooke RM, Ishida T, Hirata K, Hurt-Camejo E, Chen YE, Fan J
  • 雑誌名: J Atheroscler Thromb 巻: 19(3) ページ: 213-26
• [雑誌論文] FGD5 Mediates Pro-angiogenic Activity of Vascular Endothelial Growth Factor in Human Vascular Endothelial Cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Kurogane Y, Miyata M, Kubo Y, Nagamatsu Y, Ishida T, Kundu RK, Quertermous T, Hirata K, Rikitake Y
  • 巻: 32(4)
  • ページ: 988-96
• [雑誌論文] Orally Administered Eicosapentaenoic Acid Induces Rapid Regression of Atherosclerosis Via Modulating the Phenotype of Dendritic Cells in LDL Receptor-Deficient Mice (2011)
  • 著者名/発表者名: Nakajima K, Yamashita T, Kita T, Takeda M, Sasaki N, Kasahara K, Shinohara M, Rikitake Y, Ishida T, Yokoyama M, Hirata K
  • 雑誌名: Arterioscler Thromb Vasc Biol 巻: 31(9) ページ: 1963-72
• [雑誌論文] Pitavastatin reduces elevated IL-18 levels in Japanese subjects with hypercholesterolemia : Sub-analysis of Kansai Investigation of Statin for Hyperlipidemic Intervention in Metabolism and Endocrinology(KISHIMEN) (2011)
  • 著者名/発表者名: Fujioka Y, Fukuda A, Ishida T, Kagimoto S, Nakamura Y, Iwakura A, Hara K, Yamamoto T, Kuroe A, Ohya M, Fujimoto S, Hamamoto Y, Honjo S, Ikeda H, Nabe K, Tsuda K, Taniguchi A, Tanaka K, Koshiyama H, Kume N, Hirata K
  • 雑誌名: J Atheroscler Thromb 巻: 18(1) ページ: 8-15
• [雑誌論文] Targeted deletion of endothelial lipase increases HDL particles with anti-inflammatory properties both in vitro and in vivo (2011)
  • 著者名/発表者名: Hara T, Ishida T, Kojima Y, Tanaka H, Yasuda T, Shinohara M, Toh R, Hirata K
  • 雑誌名: J. Lipid Res 巻: 52(1) ページ: 57-67
• [雑誌論文] Oral administration of an active form of vitamin D3(calcitriol) decreases atherosclerosis in mice by inducing regulatory T cells and immature dendritic cells with tolerogenic functions (2010)
  • 著者名/発表者名: Takeda M, Yamashita T, Sasaki N, Nakajima K, Kita T, Shinohara M, Ishida T, Hirata K
  • 雑誌名: Arterioscler Thromb Vasc Biol 巻: 30(12) ページ: 2495-503
• [雑誌論文] Update on the role of endothelial lipase in HDL metabolism, reverse cholesterol transport, and atherosclerosis (2010)
  • 著者名/発表者名: Yasuda T, Ishida T, Rader DJ
  • 雑誌名: Circ J 巻: 74(11) ページ: 2263-70
• [雑誌論文] Endothelial cell-selective adhesion molecule modulates atherosclerosis through plaque angiogenesis and monocyteendothelial interaction (2010)
  • 著者名/発表者名: Inoue M, Ishida T, Yasuda T, Toh R, Hara T, Cangara HM, Rikitake Y, Taira K, Sun L, Kundu RK, Quertermous T, Hirata K
  • 雑誌名: Microvasc Res 巻: 80(2) ページ: 179-87
• [雑誌論文] Role of endothelial cell-selective adhesion molecule in hematogeneous metastasis (2010)
  • 著者名/発表者名: Cangara HM, Ishida T, Hara T, Sun L, Toh T, Rikitake Y, Kundu RK, Quertermous T, Hirata K, Hayashi Y
  • 雑誌名: Microvasc Res 巻: 80(1) ページ: 133-41
• [雑誌論文] Interaction of endothelial cell-selective adhesion molecule and MAGI-1 promotes mature cell-cell adhesion via activation of RhoA (2010)
  • 著者名/発表者名: Kimura R, Ishida T, Kuriyama M, Hirata K, Hayashi Y
  • 雑誌名: Genes Cells 巻: 15(4) ページ: 385-396
• [雑誌論文] Pitavastatin decreases expression of endothelial lipase both in vitro and in vivo (2010)
  • 著者名/発表者名: Kojima Y, Ishida T, Sun L, Yasuda T, Toh T, Rikitake Y, Fukuda A, Kume N, Koshiyama H, Taniguchi A, Hirata K
  • 雑誌名: Cardiovasc Res 巻: 87(2) ページ: 385-93
• [雑誌論文] 脂質リポ蛋白の検査血管内皮リパーゼ (2010)
  • 著者名/発表者名: 安田知行、石田達郎
  • 雑誌名: Medical Technology 巻: 38 ページ: 1361-1365
• [雑誌論文] HDL代謝における血管内皮リパーゼの役割と治療への応用 (2010)
  • 著者名/発表者名: 石田達郎、平田健一
  • 雑誌名: 医学のあゆみ 巻: 234 ページ: 7-8
• [学会発表] Establishment of a novel, high-sensitive ELISA system for human endothelial lipase (2012)
  • 著者名/発表者名: Ishida, T, Miyashita, K, Kinoshita, N, Seito, S, Hirata K, Nakajima K.
  • 学会等名: HDL Satellite symposium 2012
  • 発表場所: Cairns, Australia
  • 年月日: 20120330-0401
• [学会発表] Plasma mass and activity of endothelial lipase are associated with coronary risk factors in humans (2012)
  • 著者名/発表者名: Ishida T, Mori T, Sun L, Yasuda T, Hirata K
  • 学会等名: The XVI International Symposium on Atherosclerosis(ISA2012)
  • 発表場所: Sydney, Australia. Workshop, Oral
  • 年月日: 2012-03-27
• [学会発表] Cardiac endothelial lipase expression is augmented in the early stage of heart failure (2012)
  • 著者名/発表者名: Nakajima H, Ishida T, Sasaki M, Kondo K, Mori K, Hasokawa M, Haraguchi Y, Yasuda T, Kobayashi S, Hirata K
  • 学会等名: The XVI International Symposium on Atherosclerosis(ISA2012)
  • 発表場所: Sydney, Australia. Poster
  • 年月日: 2012-03-27
• [学会発表] Cardiac endothelial lipase expression is augmented in a murine model of heart failure (2012)
  • 著者名/発表者名: Nakajima H, Ishida T, Monguchi T, Sasaki M, Kondo K, Mori K, Hasokawa M, Haraguchi Y, Sun L, Yasuda T, Shinohara M, Toh R, Kobayashi S, Hirata K
  • 学会等名: 第76回日本循環器学会学術集会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 2012-03-17
• [学会発表] Role of endothelial lipase in HDL metabolism and atherosclerosis in humans (2011)
  • 著者名/発表者名: Ishida T, Toh R, Sun L, Yasuda T, Hirata K
  • 学会等名: 79th European Atherosclerosis Society Congress
  • 発表場所: Gothenburg, Sweden
  • 年月日: 2011-06-28
• [学会発表] Serum myeloperoxidase/paraoxonase 1 ratio is an independent predictor for repeat revascularization after percutaneous coronary intervention (2010)
  • 著者名/発表者名: Haraguchi Y, Toh R, Ishida T, Hirata K
  • 学会等名: Scientific Sessions 2010 American Heart Association
  • 発表場所: Chicago, USA
  • 年月日: 2010-11-17
• [学会発表] Plasma EL activity is inversely correlated with the HDL-cholesterol level in humans (2010)
  • 著者名/発表者名: Sun L, Ishida T, Toh R, Hirata K
  • 学会等名: 第74回日本循環器学会総会・学術集会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2010-03-05
• [学会発表] Inactivation of endothelial lipase increases anti-inflammatory HDL particles (2009)
  • 著者名/発表者名: Hara T, Ishida T, Kojima K, Hirata K
  • 学会等名: Scientific Sessions 2009 American Heart Association
  • 発表場所: Orlando, FL, USA
  • 年月日: 2009-11-17
• [学会発表] Inhibition of endothelial lipase can raise anti-atherogenic HDL particles (2009)
  • 著者名/発表者名: 石田達郎、安田知行、福田亨、平田健一
  • 学会等名: 第41回日本動脈硬化学会総会.学術集会
  • 発表場所: 下関
  • 年月日: 2009-07-17
• [図書] 血管内皮リパーゼの血中濃度と活性が血清HDL. Cと冠動脈硬化に及ぼす影響の検討.循環医学研究年報第4集 (2012)
  • 著者名/発表者名: 石田達郎
  • 総ページ数: 4-5
• [図書] 血管内皮リパーゼの臨床的意義. Annual Review糖尿病・代謝・内分泌2010 (2010)
  • 著者名/発表者名: 石田達郎、平田健一
  • 総ページ数: 152-159
  • 出版者: 中外医学社