組織特異的遺伝子改変マウスを用いた皮膚腫瘍形成における膜型上皮細胞成長因子の解析

2009 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21591434
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 白方 裕司 愛媛大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (50226320)
• キーワード: 遺伝子改変 / マウス / HB-EGF / EGFR / carcinogenesis / テトラサイクリン / トランス活性化 / shedding阻害

研究概要

表皮の増殖・分化は多くの細胞成長因子により制御されており、最も重要なものはEGFファミリーである。我々が作製した表皮特異的HB-EGFノックアウトマウスは、外見は正常であるが創傷治癒が遅延し、HB-EGFは創傷治癒機転の早期に誘導されることを見いだした。皮膚悪性腫瘍形成においてもHB-EGFが重要な働きをしているのではないかと考え、化学発癌と紫外線発癌におけるHB-EGFの役割について明らかにすることを目的とした。本年度はlox-HB-EGFホモマウスとケラチン5プロモーターで発現するcre発現マウスとの交配を繰り返すことにより表皮特異的HB-EGFノックアウトマウス:HB-EGF KOを作製した。テトラサイクリン誘導型表皮特異的HB-EGFTGマウスは2種類、遊離型HB-EGFを発現するマウスと、膜型HB-EGF(酵素により遊離型に切断されない変異体)を発現するマウスを作製しC57/BI6マウスと交配を繰り返した。表皮特異的に発現誘導させるため、K5TetOnTGマウスを作製し、これも増殖させた。これらのマウスを交配し増殖させている。現在までの所明かな皮膚の表現型は見られていない。次年度はドキシサイクリンを投与することにより、マウス表皮にてHB-EGFを発現誘導させ、表現型について観察する。ヒト表皮角化細胞を無血清培養にて培養し、細胞密度が90%に達した時点でTPAを培養液に添加し、経時的に培養液を回収し、同時に細胞を溶解し、細胞抽出液を抽出した。培養液中に遊離されたHB-EGFをバイオアッセイを用いて定量し、細胞抽出液を用いてウエスタンブロット法にてEGF受容体の活性化を抗リン酸化EGF受容体抗体を用いて検出した。その結果、TPAによるHB-EGFの膜型から遊離型への変換が表皮角化細胞においてなされていることを確認した。

研究成果

• [雑誌論文] Diagnosis and treatment of Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis with ocular complications (2009)
  • 著者名/発表者名: Sotozono C, Ueta M, Koizumi N, Inatomi T, Shirakata Y, Ikezawa Z, Hashimoto K, Kinoshita S.
  • 雑誌名: Ophthalmology 116 ページ: 685-90
  • 査読あり
• [雑誌論文] The influence of hepatic damage on serum soluble Fas ligand levels of patients with drug rashes (2009)
  • 著者名/発表者名: Tohyama M, Shirakata Y, Sayama K, Hashimoto K
  • 雑誌名: J Allergy Clin Immunol 123 ページ: 971-2
  • 査読あり
• [雑誌論文] Alteration of TLR3 pathways by glucocorticoids may be responsible for immunosusceptibility of human corneal epithelial cells to viral infections (2009)
  • 著者名/発表者名: Hara Y, Shiraishi A, Kobayashi T, Kadota Y, Shirakata Y, Hashimoto K, Ohashi Y
  • 雑誌名: Mol Vis 15 ページ: 937-48
  • 査読あり
• [雑誌論文] IL-17 and IL-22 mediate IL-20 subfamily cytokine production in cultured keratinocytesvia increased IL-22 receptor expression (2009)
  • 著者名/発表者名: Tohyama M, Hanakawa Y, Shinakata Y, Dai X, Yang L, Hirakawa S, Tokumaru S, Okazaki H, Sayama K, Hashimoto K
  • 雑誌名: Eur J Immunol 39 ページ: 2279-88
  • 査読あり
• [雑誌論文] Living Skin Equivalents Constructed Using Human Amnions as a Matrix (2009)
  • 著者名/発表者名: Yang L, Shirakata Y, Tokumaru S, Xiuju D, Tohyama M, Hanakawu Y, Hirakawa S, Sayama K, Hashimoto K
  • 雑誌名: J Dermatol Sci 56 ページ: 188-95
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nodal Lymphangiogenesis and Metastasis : Role of Tumor-Induced Lymphatic Vessel Activation in Extramammary Paget's Disease (2009)
  • 著者名/発表者名: Hirakawa S, Shirakata Y, 他
  • 雑誌名: Am J Pathol 175 ページ: 2235-48
  • 査読あり
• [学会発表] Simple method of constructing living skin equivalent using human amnionas dermal matrix (2009)
  • 著者名/発表者名: Shirakata Y, Yang L, Sayama K, Hashimoto K
  • 学会等名: The 39^<th> Annual Meeting of European Society for Dermatological Research
  • 発表場所: Budapest, Hungary
  • 年月日: 20091209-20091210
• [学会発表] Development of a new skin equivalent using de-epithelialized amnion membrane (2009)
  • 著者名/発表者名: Shirakata Y, Hashimoto K
  • 学会等名: The 4^<th> Joint Meeting of Japanese Dermatological Association and Australasian College of Dermatolog
  • 発表場所: Sapporo
  • 年月日: 20091207-20091210
• [学会発表] Inflammatory mediator TAK1 regulates hair follicle cycling (2009)
  • 著者名/発表者名: Sayama K, Shirakata Y, Ishimatsu-Tsuji Y, Kajiya K, Hirakawa S, Sugawara K, Chambon P, Akira S, Paus R, Kishimoto J, and Hashimoto K
  • 学会等名: The 69^<th> Annual Meeting of Society for Investigative Dermatology
  • 発表場所: Montreal, Canada
  • 年月日: 20090506-09