| 研究課題/領域番号 |
21591453
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
会津 隆幸 弘前大学, 大学院・医学研究科, 助教 (00400135)
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| 研究分担者 |
中野 創 弘前大学, 大学院・医学研究科, 准教授 (90281922)
澤村 大輔 弘前大学, 大学院・医学研究科, 教授 (60196334)
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| キーワード | 表皮細胞 / 線維芽細胞 / 転換 / 酵素 / 遺伝子 / 潰瘍 / 皮膚 / 治療 |
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| 研究概要 |
本研究の目的は、上皮-間葉転換(EMT)のマスター転写因子であるSnailの発現を強力にノックダウンすることにより、皮膚潰瘍底にある線維芽細胞から表皮細胞を直接作り出す画期的な治療法を開発することにある。その目的のために、培養表皮細胞や線維芽細胞にてRT-PCRやウェスタンブロットを用いてSnailの発現やリン酸の状態を見る。また、正常皮膚や潰瘍皮膚などでも確認する。Snail遺伝子やSnailの分解酵素であるglycogen synthetase kinase-3遺伝子を導入することにより、その強発現と抑制状態を再現し、各種の遺伝子発現や細胞状態を観察する。最後にSnailのsiRNAとDNAdocoyを作成し、それらを投与することにより培養線維芽細胞から表皮細胞への転換を試みる。さらに、動物に潰瘍を形成し、それらの薬剤での治療実験を行う計画であった。本年度は、動物での潰瘍治療実験を検討した。前年度に行った実験の結果、Snailの発現をコントロールすることにより、角化細胞や線維芽細胞の形態が変化することがわかったため、Snail転写因子の配列はかなり保存されていることより、ヒト細胞で検討したsiRNAとDNA decoyを用いた動物での潰瘍治療実験を行った。ラットの背部に潰瘍を形成し、そこにSnailのノックダウン効率の良かったsiRNAとDNA decoyを含有した外用剤を塗布した。その後経時的に皮膚を採取して各種遺伝子発現、潰瘍の縮小の程度を検討した。その結果、遺伝子発現や潰瘍の縮小効果に変化がみられる可能性が示唆された。
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