バイオ人工臓器研究における（膜型）レクチンの制御機能の利用

2022 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 21K08665
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 正畠 和典 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (40588381)
• 研究分担者: 前田 晃 大阪大学, 大学院医学系研究科, 招へい教員 (00319708)
• 研究期間 (年度): 2021-04-01 – 2024-03-31
• キーワード: Xenotransplantation / 糖鎖認識部位 / SP-A / ブタ血管内皮細胞 / 細胞障害率

研究実績の概要

肺胞サーファクタントSP-Aに目をつけ、そのCRD(糖鎖認識部位)部分を膜型レクチンの一つであるCL-1のCRDに置き換え、pCXN2-Vectorのcloning siteに挿入、pCXN2/CL-SP-Aを作成し、FACSでその発現を確認した。前回はヒトmonocyte/macrophageのcell lineであるTHP-1を使い、ブタ血管内皮細胞(SEC)に対する障害率を検討した。
今回はヒト抹消血からの顆粒球（PBMC）を取り出し、M-CSF(100ng/mL)を加え５日間培養しmacrophageに誘導した後、FACSにてCD14の発現を確認し、同時にSIRPaの発現を検証した。CL-SP-Aによるphagocytosis（貪食）に対する抑制効果を検討した。SECに対するヒトmacrophageの貪食率は約７５％であったのに対し、SEC/CL-SP-Aに対しては約３０％以下の値を示した。また、続いてROS産性能を検討した、SECの場合を１００％とすると、SEC/CL-SP-Aでは約７５％程度に落ちていた。さらに、反応の際のmacrophageでのサイトカイン産性能についてはmRNAを取りrt-PCR法で測定した、SEC/CL-SP-Aに対する場合は、SECに対する場合と比べて、IL-1bの産生に変化は示さなかったが、TNF-aやiNOS/Arg1は有意に下がっていた。一方、IL-10は有意に上昇していた。加えて、THP-1 Lucia NFkB細胞を用いて細胞障害を測定したが、SEC/CL-SP-AではSECに比してやはり有意にNF-kB遺伝子発現がおさえられていた。
これらの事から、hybrid分子CL-SP-AがmacrophageのSECに対する攻撃の際、その抑制に有効であることが証明された。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

CL-SP-Aのdeta が出だした。

今後の研究の推進方策

CL-SP-Aに関して、今度はヒトneutrophilでのphagocytosis等に対する制御効果を検討していく。
また、Galectin3の検討を行う

研究成果

• [雑誌論文] Immunosuppressive effect of a C5a receptor antagonist via macrophage regulation of an intestinal transplant in a rat model (2022)
  • 著者名/発表者名: Chiyoshi Toyama, Akira Maeda, Shuhei Kogata, Koki Takase, Tasuku Kodama, Kazunori Masahata, Masafumi Kamiyama, Takehisa Ueno, Yuko Tazuke, Hiroshi Eguchi, Katsuyoshi Matsunami, Shuji Miyagawa, Hiroomi Okuyama
  • 雑誌名: Transpl Immunol. 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.1016/j.trim.2022.101559
  • 査読あり
• [雑誌論文] A study of the mechanisms responsible for the action of new immunosuppressants and their effects on rat small intestinal transplantation. (2022)
  • 著者名/発表者名: Miyagawa S, Kodama T, Matsuura R, Lo PC, Sakai R, Toyama C, Takama Y, Ihara Y, Kakuta Y, Yamanaka K, Matsunami K, Eguchi H, Maeda A, Okuyama H.
  • 雑誌名: Transpl Immunol. 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.1016/j.trim.2021.101497.
  • 査読あり
• [雑誌論文] The innate cellular immune response in xenotransplantation, (2022)
  • 著者名/発表者名: Akira Maeda, Shuhei Kogata, Chiyoshi Toyama, Pei-Chi Lo, Chizu Okamatsu, Riho Yamamoto, Kazunori Masahata, Masafumi Kamiyama, Hiroshi Eguchi, Masahito Watanabe, Hiroshi Nagashima, Hiroomi Okuyama, Shuji Miyagawa,
  • 雑誌名: Frontiers in Immunol 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.3389/fimmu.2022.858604.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Complement regulation in the Triple-KO era, (2022)
  • 著者名/発表者名: Miyagawa S, Maeda A, Toyama C, Kogata S, Okamatsu C, Yamamoto R, Masahata K, Kamiyama M, Eguchi H, Watanabe M, Nagashima H, Ikawa M, Matsunami K, Okuyama H.
  • 雑誌名: Frontiers in Immunol 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.3389/fimmu.2022.860165.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Suppression of macrophage-mediated xenogeneic rejection by the ectopic expression of human CD177. (2022)
  • 著者名/発表者名: Kogata S, Lo PC, Maeda A, Okamatsu C, Sato K, Yamamoto R, Haneda T, Yoneyama T, Toyama C, Eguchi H, Masahata K, Kamiyama M, Okuyama H, Miyagawa S.
  • 雑誌名: Transpl Immunol. 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.1016/j.trim.2022.101663.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Suppression of xenogeneic innate immune response by a membrane-type human surfactant protein-A. (2022)
  • 著者名/発表者名: Toyama C, Maeda A, Kogata S, Yamamoto R, Masahata K, Ueno T, Kamiyama M, Tazuke Y, Eguchi H, Okuyama H, Miyagawa S.
  • 雑誌名: Exp Ther Med. 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.3892/etm.2022.11527.
  • 査読あり
• [学会発表] The suppression of macrophage-mediated intestinal transplant rejection by C5a receptor antagonist. (2022)
  • 著者名/発表者名: Chiyoshi Toyama, Akira Maeda, Shuhei Kogata, Koki Takase, Tasuku Kodama, Kazunori Masahata, Takehisa Ueno, Masafumi Kamiyama, Yuko Tazuke, Hiroshi Eguchi, Katsuyoshi Matsunami, Shuji Miyagawa, Hiroomi Okuyama
  • 学会等名: The Transplantation Society 2022
• [学会発表] Effect of a C5a receptor antagonist on macrophage function in an intestinal transplant rat model (2022)
  • 著者名/発表者名: Chiyoshi Toyama, Akira Maeda, Shuhei Kogata, Koki Takase, Tasuku Kodama, Kazunori Masahata, Takehisa Ueno, Masafumi Kamiyama, Yuko Tazuke, Hiroshi Eguchi, Katsuyoshi Matsunami, Shuji Miyagawa, Hiroomi Okuyama
  • 学会等名: The Transplantation Society 2022
• [学会発表] Macrophages in xenotransplantation (2022)
  • 著者名/発表者名: Shuji Miyagawa, Takuji Kawamura, Hiroomi Okuyama, and Akira Maeda
  • 学会等名: ATW 2022