| 研究課題/領域番号 |
21K08862
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
小田 紀子 大阪大学, 医学系研究科, 寄附講座准教授 (90373092)
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| 研究分担者 |
伊東 絵望子 大阪大学, 医学系研究科, 招へい教員 (80595629)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | iPS細胞 / 間葉系幹細胞 / 分化誘導 / 免疫抑制 / 他家移植 |
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| 研究実績の概要 |
iPS細胞からMSCへの分化誘導方法は複数報告されているが、bFGF依存性分化誘導法によりiPS細胞由来間葉系幹細胞（iMSC）を作製する方法を用いた。
bFGFの濃度と反応時間の検討を行い、iMSCを作製した。作製したiMSCは、CD73、CD90、CD105、CD29、CD44、CD146などの典型的なMSCの細胞表面マーカーを発現しており、マクロファージおよび単球マーカーのCD11bおよびCD14、造血マーカーCD45およびCD34は発現していなかった。
また、骨芽細胞・軟骨細胞・脂肪細胞の3系統への分化能も有していた。さらに、サイトカインアレイを用いてサイトカイン分泌能の評価を行った。Angiopoietin-1, 2、bFGF、VEGFなどの血管新生を促進するサイトカインの分泌が確認できた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
iMSCの分化誘導方法を確立し、特性評価を完了したため。
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| 今後の研究の推進方策 |
iMSCの免疫抑制能をin vitroとin vivoで評価する。MSCは炎症性サイトカインであるTNF-αやIL-12の分泌抑制と免疫抑制性サイトカインであるIL-10の分泌の促進、Th1, NK細胞のIFN-γの分泌抑制によるGVHD制御、Tregの誘導などにより免疫反応を抑制ことが報告されている。そこで、iMSCも同様の免疫制御作用を有するかをin vitroでT細胞活性化アッセイにて評価する。具体的には、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル (CFSE) でラベルした健常人ドナー由来のTリンパ球を共刺激用抗体（抗CD3抗体および抗CD28抗体）で共刺激し、iMSCと混合培養を行ってTリンパ球の増殖を評価する。さらに、in vivoでも評価を行うため、MHCダブルノックアウトNOGマウスに、ヒト末梢血単核球 (PBMC) を移植して作製したヒト化マウスの皮下にiPS細胞由来心筋細胞 (iPS-CMs) のみ、もしくはiMSCとiPS-CMsを同時移植する。iPS-CMsのみに比べてiMSCと同時移植する事により、免疫拒絶反応が抑制されているかを検証するため、移植後の皮下組織でのiPS-CMsの生着率を評価する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
COVID-19の影響により、細胞培養液を含む消耗品の一部の入荷が不安定で滞りがちであり、納期が遅れており、予定の購入ができなかったため、その分の予算が余っている。
現在、iMSCの免疫抑制能の検討に向けて準備をしており、引き続き実験を進めていくため、次年度に予算を執行する予定である。
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