| 研究課題/領域番号 |
21K08862
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
小田 紀子 大阪大学, 大学院医学系研究科, 招へい准教授 (90373092)
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| 研究分担者 |
伊東 絵望子 大阪大学, 大学院医学系研究科, 招へい教員 (80595629)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | iPS細胞由来間葉系幹細胞 / 免疫抑制 / 免疫系ヒト化マウス |
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| 研究実績の概要 |
昨年度にiPS細胞からbFGF依存性分化誘導法によりiPS細胞由来間葉系幹細胞（iMSC）を作製し、典型的なMSCの細胞表面マーカー（CD73、CD90、CD105、CD29、CD44、CD146など）の発現、骨芽細胞・軟骨細胞・脂肪細胞の3系統への分化能を確認した。
本年度はin vitroとin vivoでiMSCの免疫制御作用を検討した。in vitroでは、T細胞活性化と細胞傷害性を評価した。前者は、Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester (CFSE) で標識した健常人ドナー由来Tリンパ球を共刺激用抗体（抗CD3抗体および抗CD28抗体）で共刺激し、positive controlである骨髄由来間葉系幹細胞（BM-MSC）もしくはiMSCと混合比率を変えて培養した結果、BM-MSCと同様にiMSCの容量依存的にTリンパ球の増殖が抑制された。細胞傷害性は、NK細胞（Effector細胞）とCellTrace Violet染色したK562細胞（標的細胞）、BM-MSCもしくはiMSCを混合培養し、標的細胞の細胞死を評価した。BM-MSCと同様にiMSCはEffector細胞による標的細胞への細胞障害性を抑制した。
In vivoでは、他家移植による免疫拒絶反応の抑制を評価した。ヒト末梢血単核球を投与してもgraft-versus host disease（GVHD）が起きにくいとされるMHC class I/II-deficient NOGマウス (NOG-dKO) を用いて免疫系ヒト化マウスを作製し、iPS細胞由来心筋細胞のみの皮下移植に比べてiMSCと同時移植により免疫拒絶反応が抑制され、移植片の生着が延長するかを検証する。現在、免疫系ヒト化マウスを作製するためにNOG-dKOへのPBMCの投与量、投与回数などを検討している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
iMSCのin vitroでの免疫制御能の評価は完了したが、in vivoでの評価系（免疫系ヒト化マウス）の作製が遅れているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
iMSCの免疫制御能をin vivoで評価するため、MHC class I/II-deficient NOGマウス (NOG-dKO) を用いて免疫系ヒト化マウスを作製し、皮下にiPS細胞由来心筋細胞 (iPS-CMs) のみ、もしくはiMSCとiPS-CMsを同時移植する。iPS-CMsのみに比べてiMSCと同時移植する事により、免疫拒絶反応が抑制されているかを検証するため、移植後の皮下組織でのiPS-CMsの生着率を評価する。MHC class I/II-deficient NOGマウス (NOG-dKO) を用いた免疫系ヒト化マウスの作製が出来ない際は、免疫が正常なラット（Lewラットなど）を用いて同様の検討を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
MHC class I/II-deficient NOGマウス (NOG-dKO) を用いて免疫系ヒト化マウスの作製に時間を要しており、in vivoの免疫制御能の評価が遅れているため。
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