2022 年度実施状況報告書

Peroxiredoxin6の角膜上皮障害とドライアイにおける保護効果の解明

研究課題

研究課題/領域番号	21K16886
研究機関	金沢医科大学
研究代表者	柴田哲平金沢医科大学, 医学部, 講師 (70746700)
研究期間 (年度)	2021-04-01 – 2024-03-31
キーワード	Prdx6 / 抗酸化作用
研究実績の概要	目的　Prdx6点眼の角膜創傷治癒への影響をみる白色家兎の角膜表面にN-heptanolを塗布して、角膜上皮に一定面積の上皮欠損を作成する。1日2回　TAT-Prdx6(WT), Prdx6K122/142R, 陰性コントロールのMut-Prdx6を点眼し、1日1回前眼部のフルオレセイン生体染色像を撮影し、角膜上皮のバリアー機能を解析するため電気抵抗値を測定し、創傷治癒面積と電気抵抗値、Prdx6ノックアウトおよびPrdx6の点眼投与が創傷治癒過程におけるバリアー機能回復に与える影響を解析した結果、TAT-Prdx6(WT), Prdx6K122/142R点眼を施行した家兎にフルオレセイン染色にてコントロールに比べて創傷治癒の促進効果があり、また電気抵抗値でもコントロールに比べて数値の正常化が速かった。目的　Prdx6投与によるHS誘発性酸化ストレスに対する角膜上皮保護効果を解析する。培養ヒト不死化角膜上皮細胞(hTCEpi)を使用し、HS-DEDモデルとして、hTCEpiを450mOSMの培地（HS+ or-Prdx6）でPrdx6(+)（HS+Prdx6群）あるいはPrdx6(-)（HS-Prdx6群）にてROS産生とHMOX1とCOX2の発現をみた実験において、HS-Prdx6群では、ROS産生が増加し細胞生存率が有意に減少したが、HS+Prdx6群では、ROS産生と細胞生存率の減少が有意に抑制されていた。HS-Prdx6群では、HMOX1とCOX2発現が有意に上昇したが、HS+Prdx6群では、その発現の増加が有意に減少した結果が得られた。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 3: やや遅れている理由 TAT-Prdx6(WT), Prdx6K122/142Rの点眼作製が遅れているのと細胞遊走の実験は現在進行中だが角膜細胞がうまく育たないため遊走実験は成功していない。現在涙液採取と検体採取中であり、実験進行中であるが、患者の集まりが悪いためやや遅れている。
今後の研究の推進方策	角膜上皮細胞の育て方などは今一度論文などで培養条件など検索し、改善策を試みる。またヒト涙液の検体採取もサンプル数をよりたくさんの患者から採取できるように試みる。 TAT-Prdx6(WT), Prdx6K122/142Rの点眼作製に関しては今一度作製段階のミスがないかを確認していく。
次年度使用額が生じた理由	研究試薬等の価格により、若干の誤差が生じたため、次年度分と合わせ、物品の購入に使用する。