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2021 年度 実施状況報告書

pHLAマルチマーライブラリーを用いたT細胞標的抗原分子の網羅的解析

研究課題

研究課題/領域番号 21K18257
研究機関札幌医科大学

研究代表者

鳥越 俊彦  札幌医科大学, 医学部, 教授 (20301400)

研究分担者 久保 輝文  札幌医科大学, 医学部, 助教 (90580019)
研究期間 (年度) 2021-07-09 – 2025-03-31
キーワードT細胞抗原受容体 / HLA multimer / シングルセル解析 / 腫瘍浸潤T細胞 / メラノーマ
研究実績の概要

(1)pHLA multimerライブラリ-の合成と性能評価
HLA-A*2402に結合するEBV, CMV, Neoantigen等のT細胞エピトープペプチドをモデルとして、ペプチド・HLA複合体マルチマーライブラリー(pHLA multimerライブラリ-)の合成を実施した。今回は、in vitro translation法は用いずに、Empty HLA multimerと合成ペプチドを混合する方法によってpHLA multimerライブラリーの合成を実施した。
抗原ペプチドのアミノ酸配列情報と紐付けされたbarcode DNAを結合したpHLA multimerを合成し、数種類の抗原特異的T細胞クローンを様々な比率で混合したT細胞プールと反応させた。pHLA multimerの結合したT細胞をフローサイトメーターによってSortingし、barcode DNAのシークエンス解析によってT細胞に結合したpHLA multimerの種類と結合数を定性・定量分析した。この結果、抗原特異的TCRをもつT細胞の同定と定量化に成功した。
(2)ヒト腫瘍浸潤T細胞を用いたTCR解析
ヒトメラノーマ組織から腫瘍浸潤T細胞を分離し、これら腫瘍浸潤T細胞を対象に、メラノーマ抗原pHLA multimerライブラリー(蛍光標識)と反応させ、pHLA multimerの結合したT細胞をフローサイトメーターによってSortingした。メラノーマ抗原MART-1に特異的なTCRをもつT細胞の検出と定量化に成功した。さらに、これら抗原特異的T細胞のシングルセルTCR遺伝子解析を実施した。腫瘍浸潤T細胞のシングルセルTCR遺伝子解析によって、TCRa鎖、b鎖のレパートワーを詳細に分析することが可能となった。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

In vitro translation法によって得られるペプチドの収量が予想外に少なく、pHLA multimerの合成に至らなかったため、今回は合成ペプチドを用いてpHLA multimerライブラリーを合成した。また、pHLA multimer結合性の予備実験として、今回はフローサイトメータを用いたT細胞sortingを実施し、pHLA multimer結合T細胞のTCR遺伝子解析を実施した。
ヒトメラノーマ浸潤T細胞を対象としたシングルセルTCR遺伝子解析に成功した。

今後の研究の推進方策

シングルセル解析によってpHLA multimer結合T細胞を分析するためには、10倍以上の感度増強が必要であると思われた。したがって次年度は、pHLA multimerよりも感度を向上させたpHLA Dimer Technologyを用いてpHLAライブラリーを合成し、シングルセルTCR遺伝子解析を実施する計画である。
ヒトメラノーマだけでなく、大腸がんや肉腫にも拡大して、腫瘍浸潤T細胞のシングルセルTCR遺伝子解析とpHLA multimer解析を実施する計画である。
Q-dot pHLA multimer法の特許出願に向けて、基礎的データを蓄積する。

次年度使用額が生じた理由

新型コロナウイルス蔓延防止対策のため、リモートワークが増加し、実験の規模と頻度が減少したため、必要消耗品の購入を次年度に延期した。また、研究発表と情報交換のために参加する予定の国際会議が次年度に延期された。
繰越金は、次年度の消耗品購入と国際会議出席旅費として使用する計画である。

  • 研究成果

    (19件)

すべて 2022 2021

すべて 雑誌論文 (19件) (うち査読あり 19件、 オープンアクセス 9件)

  • [雑誌論文] High aldehyde dehydrogenase 1 activity is related to radiation resistance due to activation of AKT signaling after insulin stimulation in prostate cancer2022

    • 著者名/発表者名
      Wakamiya Takahito、Hirohashi Yoshihiko、Murai Aiko、Yanagawa Junko、Mizue Yuka、Kubo Terufumi、Hashimoto Shinichi、Murata Kenji、Kanaseki Takayuki、Tsukahara Tomohide、Nishida Sachiyo、Kohjimoto Yasuo、Hara Isao、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      Biochemical and Biophysical Research Communications

      巻: 590 ページ: 117~124

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2021.12.095

    • 査読あり
  • [雑誌論文] HLA Class I Analysis Provides Insight Into the Genetic and Epigenetic Background of Immune Evasion in Colorectal Cancer With High Microsatellite Instability2022

    • 著者名/発表者名
      Kawazu Masahito、Ueno Toshihide、Saeki Koichi、Kanaseki Takayuki、Tanegashima Tokiyoshi、Matsubara Daisuke、Torigoe Toshihiko、Nishikawa Hiroyoshi、Mano Hiroyuki, et al.
    • 雑誌名

      Gastroenterology

      巻: 162 ページ: 799~812

    • DOI

      10.1053/j.gastro.2021.10.010

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Proteogenomic identification of an immunogenic HLA class I neoantigen in mismatch repair?deficient colorectal cancer tissue2021

    • 著者名/発表者名
      Hirama Tomomi、Tokita Serina、Nakatsugawa Munehide、Murata Kenji、Nannya Yasuhito、Matsuo Kazuhiko、Inoko Hidetoshi、Hirohashi Yoshihiko、Hashimoto Shinichi、Ogawa Seishi、Takemasa Ichiro、Sato Noriyuki、Hata Fumitake、Kanaseki Takayuki、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      JCI Insight

      巻: 6 ページ: e146356

    • DOI

      10.1172/jci.insight.146356

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Evaluation of partial genotyping with HPV16/18 for triage of HPV positive, cytology negative women in the COMPACT study2021

    • 著者名/発表者名
      Hanley Sharon J.B.、Fujita Hiromasa、Aoyama-Kikawa Satomi、Kasamo Mitsunori、Torigoe Toshihiko、Matsuno Yoshihiro、Noriaki Sakuragi、for the COMPACT study group
    • 雑誌名

      Journal of Gynecologic Oncology

      巻: 32 ページ: 1-13

    • DOI

      10.3802/jgo.2021.32.e86

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Palladium-Induced Temporal Internalization of MHC Class I Contributes to T Cell-Mediated Antigenicity2021

    • 著者名/発表者名
      Ito Koyu、Kanaseki Takayuki、Tokita Serina、Torigoe Toshihiko、Hirasawa Noriyasu、Ogasawara Kouetsu
    • 雑誌名

      Frontiers in Immunology

      巻: 12 ページ: 1-12

    • DOI

      10.3389/fimmu.2021.736936

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] CD8+ T?cell Immune Surveillance against a Tumor Antigen Encoded by the Oncogenic Long Noncoding RNA <i>PVT1</i>2021

    • 著者名/発表者名
      Kikuchi Yasuhiro、Tokita Serina、Hirama Tomomi、Kochin Vitaly、Nakatsugawa Munehide、Shinkawa Tomoyo、Hirohashi Yoshihiko、Tsukahara Tomohide、Hata Fumitake、Takemasa Ichiro、Sato Noriyuki、Kanaseki Takayuki、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      Cancer Immunology Research

      巻: 9 ページ: 1342~1353

    • DOI

      10.1158/2326-6066.Cir-20-0964

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Identification of characteristic subepithelial surface granulomatosis in immune‐related adverse event‐associated enterocolitis2021

    • 著者名/発表者名
      Kubo Terufumi、Hirohashi Yoshihiko、Keira Yoshiko、Akimoto Mayuko、Ikeda Tatsuru、Kikuchi Noriaki、Iwaki Hiroyuki、Kikuchi Tomoki、Obata Masahiko、Morita Rena、Kasai Kiyoshi、Segawa Keiko、Tsukahara Tomohide、Kanaseki Takayuki、Murata Kenji、Kikuchi Yasuhiro、Shinkawa Tomoyo、Hasegawa Tadashi、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      Cancer Science

      巻: 112 ページ: 1320~1325

    • DOI

      10.1111/cas.14773

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Epithelioid granulomatous lesions express abundant programmed death ligand-1 (PD-L1): a discussion of adverse events in anti-PD-1 antibody-based cancer immunotherapy2021

    • 著者名/発表者名
      Kubo Terufumi、Hirohashi Yoshihiko、Tsukahara Tomohide、Kanaseki Takayuki、Murata Kenji、Hasegawa Tadashi、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      Human Vaccines &amp; Immunotherapeutics

      巻: 17 ページ: 1940~1942

    • DOI

      10.1080/21645515.2020.1870364

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Immunopathological basis of immune-related adverse events induced by immune checkpoint blockade therapy2021

    • 著者名/発表者名
      Kubo Terufumi、Hirohashi Yoshihiko、Tsukahara Tomohide、Kanaseki Takayuki、Murata Kenji、Morita Rena、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      Immunological Medicine

      巻: 44 ページ: 1~11

    • DOI

      10.1080/25785826.2021.1976942

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] IL‐13 modulates ?Np63 levels causing altered expression of barrier‐ and inflammation‐related molecules in human keratinocytes: A possible explanation for chronicity of atopic dermatitis2021

    • 著者名/発表者名
      Kubo Terufumi、Sato Sayuri、Hida Tokimasa、Minowa Tomoyuki、Hirohashi Yoshihiko、Tsukahara Tomohide、Kanaseki Takayuki、Murata Kenji、Uhara Hisashi、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      Immunity, Inflammation and Disease

      巻: 9 ページ: 734~745

    • DOI

      10.1002/iid3.427

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Fundamental and Essential Knowledge for Pathologists Engaged in the Research and Practice of Immune Checkpoint Inhibitor-Based Cancer Immunotherapy2021

    • 著者名/発表者名
      Kubo Terufumi、Shinkawa Tomoyo、Kikuchi Yasuhiro、Murata Kenji、Kanaseki Takayuki、Tsukahara Tomohide、Hirohashi Yoshihiko、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      Frontiers in Oncology

      巻: 11 ページ: 1-14

    • DOI

      10.3389/fonc.2021.679095

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Neuregulin-1-β1 and γ-secretase play a critical role in sphere-formation and cell survival of urothelial carcinoma cancer stem-like cells2021

    • 著者名/発表者名
      Matsuki Masahiro、Inoue Ryuta、Murai Aiko、Kubo Terufumi、Hashimoto Shinichi、Murata Kenji、Kanaseki Takayuki、Tsukahara Tomohide、Nishida Sachiyo、Tanaka Toshiaki、Kitamura Hiroshi、Masumori Naoya、Hirohashi Yoshihiko、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      Biochemical and Biophysical Research Communications

      巻: 552 ページ: 128~135

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2021.03.038

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Identification of Neoantigens in Two Murine Gastric Cancer Cell Lines Leading to the Neoantigen-Based Immunotherapy2021

    • 著者名/発表者名
      Nagaoka Koji、Sun Changbo、Kobayashi Yukari、Kanaseki Takayuki、Tokita Serina、Komatsu Toshihiro、Maejima Kazuhiro、Futami Junichiro、Nomura Sachiyo、Udaka Keiko、Nakagawa Hidewaki、Torigoe Toshihiko、Kakimi Kazuhiro
    • 雑誌名

      Cancers

      巻: 14 ページ: 106~106

    • DOI

      10.3390/cancers14010106

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Characterization of CD8<sup>+</sup> T-cell responses to non-anchor-type HLA class I neoantigens with single amino-acid substitutions2021

    • 著者名/発表者名
      Shinkawa Tomoyo、Tokita Serina、Nakatsugawa Munehide、Kikuchi Yasuhiro、Kanaseki Takayuki、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      OncoImmunology

      巻: 10 ページ: e1870062

    • DOI

      10.1080/2162402x.2020.1870062

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Possible Pseudo-progression of Non-small Cell Lung Carcinoma in a Patient With Clinical Hyper-progression Associated With Trousseau Syndrome Who Was Treated With Pembrolizumab: A Case Report2021

    • 著者名/発表者名
      SHIONOYA YOSUKE、HIROHASHI YOSHIHIKO、TAKAHASHI HARUKA、HASHIMOTO MIDORI、NISHIYAMA KAORU、TAKAKUWA YASUNARI、NAKATSUGAWA MUNEHIDE、KUBO TERUFUMI、KANASEKI TAKAYUKI、TSUKAHARA TOMOHIDE、TORIGOE TOSHIHIKO
    • 雑誌名

      Anticancer Research

      巻: 41 ページ: 3699~3706

    • DOI

      10.21873/anticanres.15161

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Prediction of treatment response from the microenvironment of tumor immunity in cervical cancer patients treated with chemoradiotherapy2021

    • 著者名/発表者名
      Someya Masanori、Tsuchiya Takaaki、Fukushima Yuki、Hasegawa Tomokazu、Hori Masakazu、Kitagawa Mio、Gocho Toshio、Mafune Shoh、Ikeuchi Yutaro、Hirohashi Yoshihiko、Torigoe Toshihiko、Iwasaki Masahiro、Matsuura Motoki、Saito Tsuyoshi、Matsumoto Yoshihisa、Sakata Koh-ichi
    • 雑誌名

      Medical Molecular Morphology

      巻: 54 ページ: 245~252

    • DOI

      10.1007/s00795-021-00290-w

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Tumor-infiltrating CD8+ T cells recognize a heterogeneously expressed functional neoantigen in clear cell renal cell carcinoma2021

    • 著者名/発表者名
      Matsuki Masahiro、Hirohashi Yoshihiko、Nakatsugawa Munehide、Murai Aiko、Kubo Terufumi、Hashimoto Shinichi、Tokita Serina、Murata Kenji、Kanaseki Takayuki、Tsukahara Tomohide、Nishida Sachiyo、Tanaka Toshiaki、Kitamura Hiroshi、Masumori Naoya、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      Cancer Immunology, Immunotherapy

      巻: 71 ページ: 905~918

    • DOI

      10.1007/s00262-021-03048-6

    • 査読あり
  • [雑誌論文] GRIK2 is a target for bladder cancer stem-like cell-targeting immunotherapy2021

    • 著者名/発表者名
      Miyata Haruka、Hirohashi Yoshihiko、Yamada Shuhei、Yanagawa Junko、Murai Aiko、Hashimoto Shinichi、Tokita Serina、Hori Kanta、Abe Takashige、Kubo Terufumi、Tsukahara Tomohide、Kanaseki Takayuki、Shinohara Nobuo、Torigoe Toshihiko
    • 雑誌名

      Cancer Immunology, Immunotherapy

      巻: 71 ページ: 795~806

    • DOI

      10.1007/s00262-021-03025-z

    • 査読あり
  • [雑誌論文] A screening assistance system for cervical cytology of squamous cell atypia based on a two‐step combined CNN algorithm with label smoothing2021

    • 著者名/発表者名
      Nambu Yuta、Mariya Tasuku、Shinkai Shota、Umemoto Mina、Asanuma Hiroko、Sato Ikuma、Hirohashi Yoshihiko、Torigoe Toshihiko、Fujino Yuichi、Saito Tsuyoshi
    • 雑誌名

      Cancer Medicine

      巻: 11 ページ: 520~529

    • DOI

      10.1002/cam4.4460

    • 査読あり

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公開日: 2023-12-25  

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