| 研究課題/領域番号 |
22K09842
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
藤枝 弘樹 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (70280972)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | ミュラー細胞 / 視細胞傷害 / p38 / 増殖 / 遊走 / 器官培養 |
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| 研究実績の概要 |
2023年度は、生体内（vivo）および網膜器官培養（explant）モデルを用いて、前年度に実施した予備実験の成果をさらに詳細に解析した。まずMMS投与によりラット視細胞傷害モデルを作製し、ミュラー細胞のp38発現と傷害後反応（増殖、DNA損傷応答、細胞死、外顆粒層への遊走、視細胞貪食など）の経過をvivoとexplantで比較した。ミュラー細胞のp38発現、増殖、DNA損傷応答はvivoとexplantで大差はなかったが、explantではミュラー細胞の遊走と視細胞貪食が顕著に抑制されていた。こうしたexplantモデルの特徴を把握したうえで、explantを用いたp38阻害実験を行った。MMS投与後1日目で培養を開始し、DIV1、DIV2、DIV3の３ステージでp38阻害の効果を検討した。p38阻害剤投与により、ミュラー細胞の増殖および外顆粒層への遊走が有意に増加し、p38がミュラー細胞の増殖と遊走を抑制していることが示唆された。p38阻害はp53とp21の発現を減少させ、p38がこれらの細胞増殖抑制因子の活性化を介してミュラー細胞の増殖を抑制している可能性が示唆された。一方、p38阻害により、Crx陽性、TUNEL陰性の生存視細胞の数が有意に増加した。傷害網膜でp38はミュラー細胞特異的に発現するので、p38阻害による視細胞生存への効果はミュラー細胞が分泌する神経保護因子等への影響を介したものである可能性があり、今後p38による神経保護因子発現の制御を詳細に検討していく予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
網膜器官培養モデルの確立と、当モデルを用いたp38阻害実験が予定通り進展しているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでは主に免疫組織化学的な解析を行ってきたが、今後はWestern blotting、qRT-PCRによる定量的な解析を進める予定である。またp38によるミュラー細胞増殖の制御、視細胞生存への影響について、そのメカニズムを詳しく解析していきたい。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本年度はほぼ予定通りに支出した。年度末に抗体等の高額試薬の購入が必要となったが、残額が不足したため、その分の使用を次年度に回すことにした。
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