再生医療のための部位特異的遺伝子組込み法の開発: 発生工学的手法を用いた基盤研究

2012 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23659493
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 血液内科学
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 小澤 敬也 自治医科大学, 医学部, 教授 (30137707)
• 研究分担者: 卜部 匡司 自治医科大学, 医学部, 講師 (40213516)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• キーワード: 再生医療 / 幹細胞 / iPS細胞 / 遺伝子導入 / 遺伝子組込み

研究概要

アデノ随伴ウイルス(AAV)が第19番染色体のAAVS1領域に組み込まれる性質を利用し、挿入変異発癌のない遺伝子操作法を開発した。ヒトAAVS1領域を持つトランスジェニックマウス由来のiPS細胞のAAVS1領域にGFPプラスミドの導入を試み、約100個のクローンを分離したが、AAVS1にGFP遺伝子が組み込まれているのは1クローンのみであった。この低率を改善するためトランスフェクション法、プラスミドの構築の再検討が必要と考えられた。

研究成果

• [雑誌論文] Minimizing the inhibitory effect of neutralizing antibody for efficient gene expression in the liver with adeno-associated virus 8 vectors. (2013)
  • 著者名/発表者名: Mimuro J, Mizukami H, Hishikawa S, Ikemoto T, Ishiwata A, Sakata A, Ohmori T, Madoiwa S, Ono F, Ozawa K, and Sakata Y
  • 雑誌名: Mol Ther 巻: 21 ページ: 318-323
  • DOI: DOI:10.1038/mt.2012.258
  • 査読あり
• [雑誌論文] NF-κB activity regulates mesenchymal stem cell accumulation at tumor sites. (2013)
  • 著者名/発表者名: Uchibori R, Tsukahara T, Mizuguchi H, Saga Y, Urabe M, Mizukami H, Kume A, Ozawa K
  • 雑誌名: Cancer Res 巻: 73 ページ: 364-372
  • DOI: DOI:10.1158/0008-5472.CAN-12-0088
  • 査読あり
• [雑誌論文] Downregulation of indoleamine-2, 3-dioxygenase in cervical cancer cells suppresses tumor growth by promoting natural killer cell accumulation. (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato N, Saga Y, Mizukami H, Wang D, Takahashi S, Nonaka H, Fujiwara H, Takei Y, Machida S, Takikawa O, Ozawa K, Suzuki M.
  • 雑誌名: Oncol Rep. 巻: 28 ページ: 1574-1578
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intra-articular injection of mesenchymal stem cells expressing coagulation factor ameliorates hemophilic arthropathy in factor VIII-deficient mice. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kashiwakura Y, Ohmori T, Mimuro J, Yasumoto A, Ishiwata A, Sakata A, Madoiwa S, Inoue M, Hasegawa M, Ozawa K, Sakata Y
  • 雑誌名: J. Thromb. Haemost. 巻: 10 ページ: 1802-1813
  • DOI: DOI:10.1111/j.1538-7836.2012.04851.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cetuximab inhibits the growth of mucinous ovarian carcinoma tumor cells lacking KRAS gene mutations. (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato N, Saga Y, Mizukami H, Wang D, Fujiwara H, Takei Y, Machida S, Ozawa K, and Suzuki M
  • 雑誌名: Oncol Rep 巻: 27 ページ: 1336-1340
  • DOI: DOI:10.3892/or.2012.1626
  • 査読あり
• [雑誌論文] Interleukin-10 expression induced by adeno-associated virus vector suppresses proteinuria in Zucker obese rats. (2012)
  • 著者名/発表者名: Ogura M, Urabe M, Akimoto T, Onishi A, Ito C, Ito T, Tsukahara T, Mizukami H, Kume A, Muto S, Kusano E, and Ozawa K
  • 雑誌名: Gene Ther 巻: 19 ページ: 476-482
  • DOI: DOI:10.1038/gt.2011.183
  • 査読あり
• [雑誌論文] Recovery of neurogenic amines in phenylketonuria mice after liver-targeted gene therapy. (2012)
  • 著者名/発表者名: Yagi H, Sanechika S, Ichinose H, Sumi-Ichinose C, Mizukami H, Urabe M, Ozawa K, and Kume A
  • 雑誌名: Neuroreport 巻: 23 ページ: 30-34
  • DOI: DOI:10.1097/WNR.0b013e32834e3a87
  • 査読あり
• [雑誌論文] Indoleamine -2,3-dioxygenase, an immunosuppressive enzyme that inhibits natural killer cell function, as a useful target for ovarian cancer therapy. (2012)
  • 著者名/発表者名: Wang D, Saga Y, Mizukami H, Sato N, Nonaka H, Fujiwara H, Takei Y, Machida S, Takikawa O, Ozawa K, Suzuki M
  • 雑誌名: Int J Oncol 巻: 40 ページ: 929-34
  • DOI: DOI:10.3892/ijo.2011.1295
  • 査読あり
• [雑誌論文] Morphologic analysi s in myelodysplastic syndromes with del(5q) treated with lenalidomide. A Japanese multi- institutional study (2012)
  • 著者名/発表者名: Matsuda A, Taniwaki M, Jinnai I, Harada H, Watanabe M, Suzuki K, Yanagita S, Suzuki T, Yoshida Y, Kimura A, Tsudo M, Tohyama K, Takatoku M, and Ozawa K
  • 雑誌名: LeukRes. 巻: 36 ページ: 575-80
  • DOI: DOI:10.1016/j.leukres.2011.11.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] Recov ery of neurogenic amines in phenylketonuria mice after liver- targeted gene therapy (2012)
  • 著者名/発表者名: Yagi H, Sanechika S, Ichinose H, Sumi-Ichinose C, Mizukami H, Urabe M, Ozawa K, Kume A
  • 雑誌名: Neuroreport 巻: 23 ページ: 30-4
  • DOI: DOI:10.1097/WNR.0b013e32834e3a87
  • 査読あり
• [雑誌論文] Vincristine potentiates the anti- proliferative effect of an aurora kinase inhibitor, VE-465, in myeloid leukemia cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshida K, Nagai T, Ohmine K, Uesawa M, Sripayap P, Ishida Y, and Ozawa K.
  • 雑誌名: Biochem Pharmacol 巻: 82 ページ: 1884-1890
  • DOI: DOI:10.1016/j.bcp.2011.09.015
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a mouse model for lymph node metastasis with endometrial cancer (2011)
  • 著者名/発表者名: Takahashi K, Saga Y, Mizukami H, Takei Y, Urabe M, Kume A, Suzuki M, and Ozawa K
  • 雑誌名: Cancer Sci 巻: 102 ページ: 2272-7
  • DOI: DOI:10.1111/j.1349-7006.2011.02099.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Selective optical control of synaptic transmission in the subcortical visual pathway by activation of viral vector- expressed halorhodopsin (2011)
  • 著者名/発表者名: Kaneda K, Kasahara H, Matsui R, Katoh T, Mizukami H, Ozawa K, Watanabe D , Isa T
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 5 ページ: 18452
  • DOI: DOI:10.1371/journal.pone.0018452
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lack of IL-21 signal attenuates graft- versus-leukemia effect in the absence of CD8 T-cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Meguro A, Ozaki K, Hatanaka K, Oh I, Sudo K, Ohmori T, Matsu H, Tatara R, Sato K, Sakata Y, Nakae S, Leonard W.J, and Ozawa K
  • 雑誌名: Bone Marrow Transplant. 巻: 46 ページ: 1557-1565
  • DOI: DOI:10.1038/bmt.2010.342
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mesenchymal stromal cells inhibit Th17 but not regulatory T-cell differentiation. (2011)
  • 著者名/発表者名: atara R, Ozaki K, Kikuchi Y, Hatanaka K, Oh I, Meguro A, Matsu H, Sato K, and Ozawa K
  • 雑誌名: Cytotherapy 巻: 13 ページ: 686-694
  • DOI: DOI:10.3109/14653249.2010.542456
  • 査読あり
• [雑誌論文] Complete restoration of phenylalanine oxidation in phenylketonuria mouse by a self-complementary adeno-associated virus vector (2011)
  • 著者名/発表者名: Yagi H, Ogura T, Mizukami H, Urabe M, Hamada H, Yoshikawa H, Ozawa K, and Kume, A
  • 雑誌名: J. Gene Med 巻: 13 ページ: 114-122
  • DOI: DOI:10.1002/jgm.1543
  • 査読あり
• [学会発表] Anti-tumor effects of anti-CD19 chimeric antigen receptor modified T-cells for B cell lymphoma. (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsukahara T
  • 学会等名: 第71回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: ロイトン札幌(札幌)
  • 年月日: 20120919-21
• [学会発表] A novel anti-tumor mechanism of galanin receptor type 2 in head and neck qquamous cell carcinoma cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Uehara T
  • 学会等名: 第71回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: ロイトン札幌(札幌)
  • 年月日: 20120919-21
• [学会発表] Relationship between vector dose and factor IX expression in non-human primates following administration of AAV8 vectors (2012)
  • 著者名/発表者名: Mizukami H
  • 学会等名: 第18回日本遺伝子治療学会学術集会
  • 発表場所: 熊本テルサ(熊本)
  • 年月日: 20120628-30
• [学会発表] AADC gene therapy for parkinson disease: long term outcomes and preliminary results of an autopsy case (2012)
  • 著者名/発表者名: Muramatsu S
  • 学会等名: 第18回日本遺伝子治療学会学術集会
  • 発表場所: 熊本テルサ(熊本)
  • 年月日: 20120628-30
• [学会発表] Interleukin-10 prevents the progression of peritoneal fibrosis in an animal model of peritoneal dialysis (2012)
  • 著者名/発表者名: Onishi A
  • 学会等名: 第18回日本遺伝子治療学会学術集会
  • 発表場所: 熊本テルサ(熊本)
  • 年月日: 20120628-30
• [学会発表] Genetically modified T lymphocytes targeted to CD19 mediated-cytotoxicity for B cell lymphoma (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsukahara T
  • 学会等名: 第18回日本遺伝子治療学会学術集会
  • 発表場所: 熊本テルサ(熊本)
  • 年月日: 20120628-30
• [学会発表] Manipulationg the genome in stem cells. (2012)
  • 著者名/発表者名: Urabe M
  • 学会等名: 第18回日本遺伝子治療学会学術集会
  • 発表場所: 熊本テルサ(熊本)
  • 年月日: 20120628-30
• [学会発表] Site-specific gene insertion of transgene by adeno-associated virus integration machinery (2012)
  • 著者名/発表者名: Urabe M
  • 学会等名: The 10th Annual Meeting of The International Society for Stem Cell Research
  • 発表場所: Pacifico Yokohama (Yokohama)
  • 年月日: 20120613-16
• [学会発表] Dose-response relationship of factor IX expression in non-human primates following IV administration of AAV vectors (2012)
  • 著者名/発表者名: Mizukami H
  • 学会等名: The 15th Annual Meeeting of The American Society of Gene and Cell Therapy
  • 発表場所: Pennsylvania Convention Center (Philadelphia, USA))
  • 年月日: 20120516-19
• [学会発表] AAV-vector mediated systemic delivery of interleukin-10 attenuates the progression of peritoneal fibrosis in a rat model of peritoneal dialysis (2012)
  • 著者名/発表者名: Onishi A
  • 学会等名: The 15th Annual Meeeting of The American Society of Gene and Cell Therapy
  • 発表場所: Pennsylvania Convention Center (Philadelphia, USA)
  • 年月日: 20120516-19
• [学会発表] Evaluation of anti-tumor effects mediated by engineered T lymphocytes expressing a CD19 specific CAR for B cell lynphoma. (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsukahara T
  • 学会等名: The 15th Annual Meeeting of The American Society of Gene and Cell Therapy
  • 発表場所: Pennsylvania Convention Center (Philadelphia, USA)
  • 年月日: 20120516-19
• [学会発表] The adeno-associated virus p5 promoter sequence mediated integration of transgene into the AAVS1 site (2011)
  • 著者名/発表者名: Urabe M
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜(横浜)
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] The p5 promoter of adeno- associated virus for AAVS1-specific integration. (2011)
  • 著者名/発表者名: Urabe M
  • 学会等名: The XVth International Congress of Virology
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター(札幌)
  • 年月日: 2011-09-13
• [学会発表] Relationship between neutralizing Antibody and factor IX expression in non-human primates following iv administration of AAV8 vectors (2011)
  • 著者名/発表者名: Mizukami H
  • 学会等名: The XVth International Congress of Virology
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター(札幌)
  • 年月日: 2011-09-13
• [学会発表] The role of the p5 promoter of adeno-associated virus in AAVS1-directed integration. (2011)
  • 著者名/発表者名: Urabe M
  • 学会等名: The 17th Annual Meeting of the Japan Society of Gene Therapy
  • 発表場所: 九州大学医学部百年講堂(福岡)
  • 年月日: 2011-07-17
• [学会発表] The p5 promoter sequence of AAV genome regulates the direction of transgene insertion into the AAVS1 site. (2011)
  • 著者名/発表者名: Urabe M
  • 学会等名: The 14th Annual Meeting of the American Society of Gene and Cell Therapy
  • 発表場所: The Washington State Convention Center (Seattle, USA)
  • 年月日: 2011-05-21
• [学会発表] Relationship between neutralizing Antibody and factor IX expression in non-human primates following iv administration of AAV8 vectors (2011)
  • 著者名/発表者名: Mizukami H
  • 学会等名: The 14th Annual Meeting of the American Society of Gene and Cell Therapy
  • 発表場所: The Washington State Convention Center (Seattle, USA)
  • 年月日: 2011-05-19