| 研究課題/領域番号 |
24248010
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| 研究機関 | 独立行政法人農業生物資源研究所 |
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研究代表者 |
飯 哲夫 国立研究開発法人農業生物資源研究所, 植物科学研究領域, 領域長 (40157813)
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| 研究分担者 |
吉川 学 国立研究開発法人農業生物資源研究所, 植物・微生物間相互作用研究ユニット, 主任研究員 (80391564)
石橋 和大 国立研究開発法人農業生物資源研究所, 植物・微生物間相互作用研究ユニット, 主任研究員 (20611742)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | RISC複合体 / trans-acting siRNA / microRNA / リボソーム |
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| 研究実績の概要 |
植物は、小分子RNAとARGONAUTEタンパク質を含むRISC複合体によって切断したRNAをRNA依存性RNAポリメラーゼにより二本鎖RNAに変換し、その二本鎖RNAをDICER-LIKE (DCL)によって新生siRNA（二次的siRNA）にプロセスすることによりRNAサイレンシングを増幅する機構を有している。本研究では、RNAサイレンシング増幅機構を明らかにすることを目的として、同様の過程を経て生じると考えられるtrans-acting siRNAの生成機構を、主に植物細胞抽出液による試験管内系を用いて解析した。
平成２７年度は、いくつかの培養細胞に由来する脱液胞化プロトプラストから細胞抽出液を調製し、RISC複合体によって切断されたRNAからsiRNAが生じるかを調べた。その結果、ひとつの培養細胞からRNAサイレンシング増幅活性を有する抽出液を得た。
また、in vitroで得られた結果をin vivoで確認するために、RNAサイレンシング増幅に関わる遺伝子をRNAi法によりノックダウンした形質転換タバコにタバコモザイクウイルスを接種し、ウイルス感染の拡大を調べた。その結果、DCL2およびDCL4の発現を抑制したタバコではウイルス感染域の拡大が認められ、免疫染色による非形質転換タバコへの接種との比較から、これらの因子の機能は、ウイルスが維管束から葉肉細胞組織への移行の段階での抑制において重要であることが示された。
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| 現在までの達成度 (段落) |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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