哺乳動物精子の卵活性化能に対する新しい評価法の確立

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24592441
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 伊藤 千鶴 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (80347054)
• 研究分担者: 年森 清隆 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20094097)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 精子 / 卵活性化能 / 核周囲物質 / 中心体関連タンパク質 / MN13 / ODF2 / equatorin

研究実績の概要

平成26年度は【目的1-2】と【目的2】に対する実験を行い、その結果をまとめて論文および学会発表を行った。Equatorinと卵活性化との関係をlive imageで解析する準備として、Equatorin-EGFPトランスジェニック(Tg)マウスの精子先体膜を超顕微鏡STED CWを用いて撮影し、電子顕微鏡像と比較解析を行った。その結果、電子顕微鏡でしか解析できなかった外先体膜と内先体膜を光顕レベルで解析できることを証明し、その解析結果をMicroscopy誌に発表した(in press. Doi:10.1093/jmicro/dfu101)。ODF2-2α-EGFP Tgマウスを用いてODF2-2α (isoform c)の発現と局在を解析し、その結果をまとめて第59回日本生殖医学会学術講演会･総会(東京)およびInternational Microscoy Congress 2014 (プラハ)で発表した。
また、ODF2 isoformの機能を解析するために、両アリルにODF2-2α-EGFPが導入された発色の強いODF2-2α-EGFP Tg雄とODF2ヘテロ雌を交配させてODF2-2α-EGFP遺伝子を持つODF2-2α-EGFPヘテロマウスを作製した。培養細胞系に関しては、ODF2 isoform (1α, 2α, 3β, 4)にそれぞれEGFPとmCherryを付けた2種類のisoformを発現するようにデザインした安定発現細胞株を作製した。IRES側のisoformの発現が弱かったために、IRESに換えてCMVプロモーターを入れたvectorを作製中である。今後は、培養細胞を用いた実験系の継続とODF2-2α-EGFPヘテロマウスの解析を行う。

研究成果

• [雑誌論文] Analysis of the complexity of the sperm acrosomal membrane by super-resolution stimulated emission depletion microscopy compared with transmission electron microscopy. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ito C, Yamatoya K, Toshimori K.
  • 雑誌名: Microscopy 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1093/jmicro/dfu101
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] A mutation of COX6A1 causes a recessive axonal or mixed form of Charcot-Marie-Tooth disease. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tamiya G, Makino S, Hayashi M, Abe A, Numakura C, Ueki M, Tanaka A, Ito C, Toshimori K, Ogawa N, Terashima T, Maegawa H, Yanagisawa D, Tooyama I, Tada M, Onodera O, Hayasaka K.
  • 雑誌名: Am J Hum Genet. 巻: 95 ページ: 294-300
  • DOI: 10.1016/j.ajhg.2014.07.013
  • 査読あり
• [雑誌論文] 精子の質評価-精子の構造と精能の評価 Evaluation of sperm quality (2014)
  • 著者名/発表者名: 年森清隆、伊藤千鶴
  • 雑誌名: 医学のあゆみ 巻: 249 ページ: 31-37
  • 査読あり
• [学会発表] Sperm acrosomal membrane complex analyzed by STED using Equatorin-EGFP transgenic mice. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ito C
  • 学会等名: Proceedings of the 120th Annual Meeting of The Japanese Association of Anatomists and the 92nd Annual Meeting of The Physiological Society of Japan
  • 発表場所: Kobe Convention Center(兵庫県、神戸市)
  • 年月日: 2015-03-21 – 2015-03-23
• [学会発表] Searching the enzyme responsible for molecular weight reduction of sperm acrosomal protein Equatorin during acrosome reaction. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yamatoya K
  • 学会等名: Proceedings of the 120th Annual Meeting of The Japanese Association of Anatomists and the 92nd Annual Meeting of The Physiological Society of Japan
  • 発表場所: Kobe Convention Center(兵庫県、神戸市)
  • 年月日: 2015-03-21 – 2015-03-23
• [学会発表] Basigin interacts with monocarboxylate transporter 2 in the mouse testes and sperm. (2015)
  • 著者名/発表者名: Maekawa M
  • 学会等名: Proceedings of the 120th Annual Meeting of The Japanese Association of Anatomists and the 92nd Annual Meeting of The Physiological Society of Japan
  • 発表場所: Kobe Convention Center(兵庫県、神戸市)
  • 年月日: 2015-03-21 – 2015-03-23
• [学会発表] Equatorin-mediated sperm-egg interaction. (2015)
  • 著者名/発表者名: Toshimori K
  • 学会等名: Proceedings of the 120th Annual Meeting of The Japanese Association of Anatomists and the 92nd Annual Meeting of The Physiological Society of Japan
  • 発表場所: Kobe Convention Center(兵庫県、神戸市)
  • 年月日: 2015-03-21 – 2015-03-23
  • 招待講演
• [学会発表] ODF2 isoform c の発現と運命 (2014)
  • 著者名/発表者名: 伊藤千鶴
  • 学会等名: 第59回日本生殖医学会学術講演会
  • 発表場所: 京王プラザホテル(東京都、新宿区）
  • 年月日: 2014-12-04 – 2014-12-05
• [学会発表] SPESP1 ノックアウトマウスの先体反応に伴う先体タンパク質の局在と分子量変化 (2014)
  • 著者名/発表者名: 大和屋健二
  • 学会等名: 第59回日本生殖医学会学術講演会
  • 発表場所: 京王プラザホテル(東京都、新宿区）
  • 年月日: 2014-12-04 – 2014-12-05
• [学会発表] ヒト精子ミトコンドリアの形態異常と不妊症 (2014)
  • 著者名/発表者名: 年森清隆
  • 学会等名: 第59回日本生殖医学会学術講演会
  • 発表場所: 京王プラザホテル(東京都、新宿区）
  • 年月日: 2014-12-04 – 2014-12-04
• [学会発表] Toshimori K. Analyses of sialylation status of sperm acrosomal protein Equatorin and enzyme responsible for molecular weight shift during acrosome reaction. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamatoya K
  • 学会等名: The 37th Annual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan.
  • 発表場所: Pacifico Yokohama（神奈川県、横浜市）
  • 年月日: 2014-11-27 – 2014-11-27
• [学会発表] Sperm ODF2: analysis using ODF2-EGFP transgenic mice. (2014)
  • 著者名/発表者名: Toshimori K
  • 学会等名: 18th International Microscopy Congress (IMC 2014)
  • 発表場所: Prague Congress Center (Prague, Czech Repblic)
  • 年月日: 2014-09-07 – 2014-09-12
• [学会発表] 精子頭部のキャパシテーションと先体反応 (2014)
  • 著者名/発表者名: 年森清隆
  • 学会等名: 日本アンドロロジー学会第33回学術大会 第20回精子形成・精巣毒性研究会
  • 発表場所: 軽井沢プリンスホテルウエスト（長野県、北佐久郡）
  • 年月日: 2014-06-12 – 2014-06-12
  • 招待講演
• [図書] The Spermatozoon. In Knobil and Neill's Physiology of Reproduction (TM. Plant and A. Zeleznik, Eds), 4th ed. (2014)
  • 著者名/発表者名: Toshimori K, and Eddy EM.
  • 総ページ数: 2684
  • 出版者: Academic Press
• [図書] Sexual Reproduction in Animals and Plants. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ito C, Yamatoya K, Toshimori K.
  • 総ページ数: 480
  • 出版者: Springer
• [備考] 生殖生物医学ＨＰ
  • URL: http://www.m.chiba-u.ac.jp/class/devbiol/
• [産業財産権] Method of identifying compounds that inhibit fertilization (2014)
  • 発明者名: Kiyoytaka Toshimori, Chizuru Ito
  • 権利者名: Kiyoytaka Toshimori, Chizuru Ito
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: US 8,741,583 B2
  • 出願年月日: 2014-06-03
  • 取得年月日: 2014-06-30
  • 外国