新規Ｔ細胞受容体単離システムを応用した慢性肝炎治療用ペプチドワクチンの開発

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 24791019
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 感染症内科学
• 研究機関: 富山大学
• 研究代表者: 小林 栄治 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 助教 (70459733)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: ペプチドワクチン / T細胞受容体 / Cytotoxic T lymphocyte

研究概要

本研究では我々が独自に開発したT細胞受容体（TCR）遺伝子クローニングシステムを用い、C型肝炎ウイルス（HCV）特異的TCR遺伝子の網羅的なクローニングを行い、エピトープに対するそれぞれのTCRの親和性を解析する。
HCVの構成タンパク質について計90個の抗原候補ペプチドを予測した後、慢性肝炎患者でHLA-A24陽性患者10人の末梢血リンパ球を上記ペプチドカクテルで刺激し、活性化するCD8+T細胞を検出した。その結果、4人の患者から活性化したCD8+T細胞が検出された。今後はこれら活性化したCD8+T細胞からTCRのクローニングを行い、クローニングしたTCRの親和性比較を行う。

研究成果

• [雑誌論文] A novel system for cloning human TCRs : Cutting short the way to TCR-based anticancer therapy (2014)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Kishi H, Muraguchi A
  • 雑誌名: Oncoimmunology 巻: 3(1) ページ: e27258
  • URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3960297/
  • 査読あり
• [雑誌論文] Retroviral vectors for homologous recombination provide efficient cloning and expression in mammalian cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Kishi H, Ozawa T, Horii M, Hamana H, Nagai T, Muraguchi A
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun 巻: 444(3) ページ: 319-24
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2014.01.049
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel cloning and expression system yields and validates TCRs from blood lymphocytes of cancer patients within 10 days (2013)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Mizukoshi E, Kishi H, Ozawa T, Hamana H, Nagai T, Nakagawa H, Jin S, Kaneko S and Muraguchi A
  • 雑誌名: Nat. Med 巻: 19(11) ページ: 1542-6
  • DOI: 10.1038/nm.3358
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel rabbit immunospot array assay on a chip allows for the rapid generation of rabbit monoclonal antibodies with high affinity (2012)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Piao X, Kobayashi E, Zhou Y, Sakurai H, Andoh T, Jin A, Kishi H, Muraguchi A
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 7(12) ページ: e52383
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0052383
  • 査読あり
• [雑誌論文] Unbiased analysis of TCRα/β chains at the single-cell level in human CD8+ T-cell subsets (2012)
  • 著者名/発表者名: K Sun X, Saito M, Sato Y, Chikata T, Naruto T, Ozawa T, Kobayashi E, Kishi H, Muraguchi A, Takiguchi M
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 7(7) ページ: e40386
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0040386
  • 査読あり
• [雑誌論文] The binding affinity of a soluble TCR-Fc fusion protein is significantly improved by crosslinkage with an anti-Cβ antibody (2012)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Horii M, Kobayashi E, Jin A, Kishi H, Muraguchi A
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun 巻: 422(2) ページ: 245-9
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2012.04.134
  • 査読あり
• [学会発表] Cloning and functional analysis of human telomerase reverse transcriptase (hTERT)-specific TCRs from peptide-vaccinated patients (2013)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kobayashi, Hidetoshi Nakagawa, Hiroshi Hamana, Hiroyuki Kishi, Tatsuhiko Ozawa, Aishun Jin and Atsushi Muraguchi
  • 学会等名: 第42回日本免疫学会総会
  • 発表場所: 幕張
  • 年月日: 2013-12-11
• [学会発表] A novel cloning system of human antigen-specific TCRs can confer the candidates for cancer gene therapy (2013)
  • 著者名/発表者名: E.kobayashi, Mizukoshi E., Kishi H., Hamana H., Nagai T., Ozawa T., Nakagawa H., Jin A., Kaneko S., and Muraguchi A
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2013-10-03
• [学会発表] Cloning of human antigen-specific TCRs can confer the candidates for cancer gene therapy (2013)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kobayashi, Eishiro Mizukoshi, Hiroyuki Kishi, Hiroshi Hamana, Terumi Nagai, Tatsuhiko Ozawa , Hidetoshi Nakagawa, Aishun Jin, Shuichi Kaneko and Atsushi Muraguchi
  • 学会等名: 15th International Congress of Immunology
  • 発表場所: Milan
  • 年月日: 2013-08-22
• [学会発表] マイクロウェルアレイチップを用いたウサギモノクローナル抗体の迅速作製法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦, 朴 秀虹, 小林栄治, 周越, 櫻井宏明, 安東嗣修, 金 艾順, 岸 裕幸, 村口 篤
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 2012-12-11
• [学会発表] Comparison of TCR repertoires in EBV-specific T cells detected by three different staining methods (2012)
  • 著者名/発表者名: 浜名 洋, 小林栄治, 岸 裕幸, 小澤龍彦, 金 艾順, 村口 篤
  • 学会等名: 第41回日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2012-12-05
• [学会発表] The binding affinity of a soluble TCR-Fc fusion protein is significantly improved by crosslinkage with an anti-Cβ antibody (2012)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦, 小林栄治, 金 艾順, 岸裕幸, 村口 篤
  • 学会等名: 第41回日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2012-12-05
• [学会発表] Detection of antigen-stimulated cytokine secretion in human T-cells at single cell levels on a live cell chip (2012)
  • 著者名/発表者名: 岸 裕幸, 金 艾順, 小林栄治, 小澤龍彦, 浜名 洋, 村口 篤
  • 学会等名: 第41回日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2012-12-05
• [学会発表] A novel human TCR efficient cloning system confers candidate for TCR gene therapy within 10 days (2012)
  • 著者名/発表者名: E.kobayashi, Mizukoshi E., Kishi H., Hamana H., Nagai T., Ozawa T., Nakagawa H., Jin A., Kaneko S., and Muraguchi A
  • 学会等名: 27th Annual Meeting of Society for Immunotherapy of Cancer
  • 発表場所: North Bethesda
  • 年月日: 2012-10-26
• [学会発表] がんのTCR 遺伝子治療にむけた候補TCR 遺伝子の迅速クローニング法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 岸 裕幸, 小林栄治, 水腰英四郎, 小澤龍彦, 金子周一, 村口 篤
  • 学会等名: 第71回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2012-09-19
• [学会発表] 抗原特異的T 細胞受容体遺伝子の超迅速クローニングシステムの構築 (2012)
  • 著者名/発表者名: 小林栄治, 水腰英四郎, 岸 裕幸, 小澤龍彦, 浜名 洋, 長井輝美, 金 艾順, 金子周一, 村口 篤
  • 学会等名: 第16回日本がん免疫学会総会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2012-07-26
• [産業財産権] 抗原特異的T細胞受容体の取得方法 (2014)
  • 発明者名: 小林栄治, 岸裕幸, 村口篤
  • 権利者名: 国立大学法人富山大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2014-007576
  • 出願年月日: 2014-01-20
• [産業財産権] T細胞受容体のクローニング方法 (2013)
  • 発明者名: 村口篤, 岸裕幸, 小林栄治, 小澤龍彦
  • 権利者名: 国立大学法人富山大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: PCT/JP2013/070028
  • 出願年月日: 2013-07-24
  • 外国
• [産業財産権] T細胞の刺激方法およびその利用 (2013)
  • 発明者名: 岸裕幸, 村口篤, 浜名洋, 小林栄治, 小澤龍彦
  • 権利者名: 国立大学法人富山大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: PCT/JP2013/056076
  • 出願年月日: 2013-03-06
  • 外国
• [産業財産権] 外来遺伝子導入用ベクター及び外来遺伝子が導入されたベクターの製造方法 (2013)
  • 発明者名: 堀井雅恵, 岸裕幸, 小林栄治, 小澤龍彦, 村口篤
  • 権利者名: 国立大学法人富山大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特許第5246904号
  • 取得年月日: 2013-04-19
• [産業財産権] T細胞受容体のクローニング方法 (2012)
  • 発明者名: 村口篤, 岸裕幸, 小林栄治, 小澤龍彦
  • 権利者名: 国立大学法人富山大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2012-164442
  • 出願年月日: 2012-07-25