本申請の目的は,新しい照明システム,アキシコンレンズを用いた斜光照明システムを開発することにより,細胞の上面のごく一部のみを励起することが可能となる.分解能の高いビーズアッセイ法と組み合わせることにより,高分解能の回転・蛍光の同時観察が可能となり,べん毛モーターの回転方向転換メカニズムに迫ることが可能となる.この手法はバクテリアなどの原核生物のみならず,真核生物にも応用可能である.真核生物においては従来シート照明などの手法が用いられていたが,新しい照明システムを用いることにより照射深さを10分の1以下にすることが可能となり,劇的な背景光の減少につながり,S/Nの向上が期待できる. 申請時においては,アキシコンレンズを用いたビームプロファイルを用いた手法を計画していた.現時点ではさらに,フラットトップレーザー,マスクを用いたプロファイルなど,様々なビームプロファイルを検討している.現時点では,直径1ミクロンの蛍光ビーズを用いて期待される蛍光の変化が計測できるかを検討中である.また,大腸菌の上部のみの局所励起のためには,オフセットを与えたビームを入射する必要がある.しかし光学的には照射ビームを若干斜めにする必要があり,その光学設計が複雑になる恐れがある.そこであえて菌体をオフセットした系による計測も試みている.この系では対象となる菌体が光学系の中心からオフセットされた状態となるため,視野から外れる恐れ,感度が減少する恐れがある.そこで,菌体だけではなく,サンプルからカメラに向かう光学系をオフセットすることにより,常時サンプルを後方光学系の中心に置くことができ,最適な光学系を実現することが可能となる.
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