研究課題
初期化因子のうちKlf4の発現量を調節できるベクター（SeVdp(fKOSM)）を用いて、iPS細胞誘導が途中で停止した細胞（paused iPSC）を誘導した。Klf4の発現量を変えることによって、異なる段階で停止したpaused iPSCを用意し、それらについて、DNAマイクロアレイを用いて、全ゲノムの遺伝子発現データを取得した。次に、得られたデータについて、解析ソフトGeneSpringGX10を用いてクラスタリング解析を行い、Klf4発現量依存的に、paused iPSCにおける発現量が異なる遺伝子群を同定した。Klf4依存的に発現量が増加する遺伝子の中には、多能性維持に関わる遺伝子が多く存在したことから、paused iPSCでは、Klf4発現量依存的に多能性が異なることが、全ゲノムの遺伝子発現解析からも証明された。以上のデータを論文にまとめ、Stem Cell Reports誌に投稿し、掲載された（Nishimura K et al. 2014）。また、論文の内容について大学のHPでプレスリリースを行い、それに関する記事が、2014年10月3日付けの日本経済新聞に掲載された。また、paused iPSCにおいて、Klf4に対するChIP-seq解析を行うために、Flag-tag付きKlf4を発現するpaused iPS細胞誘導用ベクター（SeVdp(fKgOSM)）を作製した。このベクターを用いて、Klf4発現量を調節しながらiPS細胞を誘導したところ、SeVdp(fKOSM)を用いた時と同様に、Klf4発現量依存的に多能性が異なるpaused iPSCが得られたことから、Flag-tagはpaused iPSC誘導には影響しないことを明らかにした。そして、paused iPSCからクロマチンを調整し、抗Flag抗体を用いてクロマチン免疫沈降を行う方法を確立した。
3: やや遅れている
研究成果を論文発表することができ、新聞に記事が掲載されたので、その点では進展したと言える。また、ChIP-seq解析のための準備として、新たなベクターも作製し終えた。しかし、予算が足りないためにChIP-seqの解析委託をすることが出来なかったため、やや遅れているとした。
今年度はまず、昨年度用意したベクターを用いてChIP-seq解析を行い、その結果を元に、Klf4発現量依存的な多能性獲得機構を明らかにすることを試みる。また、その知見を活かして、高い多能性を獲得したiPS細胞をより効率良く誘導する方法の確立する。さらに、同様の方法でヒトpaused iPSCの誘導も試みて、ヒトiPS細胞誘導におけるKlf4発現量依存的な多能性獲得機構についても解析を試みる。
Stem Cell Reports誌に掲載された論文の内容について、大学のホームページにプレスリリースしたもの。
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すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件、 オープンアクセス 1件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (5件) 備考 (1件)
Stem Cell Reports
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https://www.tsukuba.ac.jp/attention-research/p20141003010.html
