2002 Fiscal Year Annual Research Report
酵母における膜輸送系と翻訳装置合成系間の制御機構に関する研究
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01J09023
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Research Institution | Hiroshima University |
Principal Investigator |
三好 啓太 広島大学, 大学院・生物圏科学研究科, 特別研究員(DC1)
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Keywords | リボソーム生合成 / 膜輸送経路 / シグナル伝達 / 転写制御 |
Research Abstract |
当研究グループでは、出芽酵母において膜輸送経路を遮断するとリボソーム構成成分であるrRNAとリボソーム蛋白質の遺伝子群の転写が顕著に、しかも特異的に抑制されることを見出している。これまでにこのシグナル伝達欠損を持つ酵母変異株から、原因遺伝子として新規遺伝子RRS1とリボソーム蛋白質遺伝子RPL11を取得した。RRS1はrRNA前駆体プロセシング及び60Sリボソームサブユニットアセンブリに必要であること、Rrs1とRpl11が相互作用することを明らかにしている。以下、今年度の研究実績を示す。 (1)免疫沈降法によりRrs1とRpl11に相互作用があることを明らかにした。さらに60Sリボソーム画分特異的にRrs1が存在することを、ポリソームパターンの解析により明らかにした。このことからRrs1はRpl11に結合することにより60Sサブユニットの生合成に関与し、膜輸送系阻害時のシグナル伝達に60Sサブユニットアセンブリ系が関与していると考えられる。(J. Biol. Chem. 277:18334-18339) (2)ツーハイブリットスクリーニングにより、Rrs1と相互作用する蛋白質として、新規蛋白質Rpf2を取得した。Rpf2は核蛋白質で主に核小体に局在し、Rpl11と相互作用することを明らかにした。またプライマー伸長法による解析から、Rpf2及びRrs1がそれぞれ、27SB rRNA前駆体から25S rRNAのプロセシングに必須であることを明らかにした。以上のことから、Rrs1及びRpf2、Rpl11の複合体がrRNA前駆体に結合し、プロセシングに関与すると考えられる。(J. Biol. Chem. 277:28780-28786) (3)膜輸送系阻害時のシグナル伝達において、RRS1の遺伝学的上流にPKC1の関与が示唆されている。そこで膜輸送系阻害時のおいて、Rrs1及びRap1(リボソーム蛋白質遺伝子群の転写因子)が、リン酸化・脱リン酸化修飾を受けているかを無機リン酸の取り込み実験及び免疫沈降法により調べた。現在までのところ、有意な結果は得られていない。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Keita Miyoshi: "Normal assembly of 60S ribosomal subunits is required for the signaling in response to a secretory defect in Saccharomyces cerevisiae"The Journal of Biological Chemistry. 277(21). 18334-18339 (2002)
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[Publications] Daisuke Morita: "Rpf2p, an evolutionarily conserved protein, interacts with ribosomal protein L11 and is essential for processing of 27SB pre-rRNA to 25S rRNA and 60S ribosomal subunit assembly in Saccharomyces cerevisiae"The Journal of Biological Chemistry. 277(32). 28780-28786 (2002)
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[Publications] Keita Miyoshi: "Transcription of genes encoding trans-acting factors required for rRNA maturation/ribosomal subunit assembly is coordinately regulated with ribosomal protein genes and involves Rap1 in Saccharomyces cerevisiae"Nucleic Acid Research. 31(7)(in press). (2003)