| Research Abstract |
キュウリ芽ばえは発芽直後,根と胚軸の境界領域にペグと呼ばれる突起状の組織を形成する.境界領域におけるペグ形成面の決定は重力によって制御されており,当研究室ではこれまでに,オーキシンがペグ形成を誘導すること,および,重力に応答して境界領域で偏差的に分布したオーキシンがオーキシン誘導性遺伝子の偏差的発現を引き起こすことを示してきた.私はこれまでに,ペグ形成におけるオーキシンの作用機構を明らかにすることを目的に,オーキシン誘導性遺伝子の転写因子であるARFファミリーとそのネガティブレギュレーターであるAux/IAAファミリーに着目した研究を行なってきた.そして,ペグ形成開始初期,境界領域でmRNAレベルの高いCsARF2,CsARF5,CsIAA1ならびにCsIAA2は,ペグ形成のためのオーキシンによる転写制御に関与すると推測された.そこで今年度は,これらの分子の転写活性能をBY-2プロトプラストを用いたトランジェントアッセイにより解析した.その結果,CsARF2が,オーキシン誘導性プロモーターであるDR5に対し,オーキシンに応答して転写を活性化することが示され,CsARF2がペグ形成時のオーキシン誘導性遺伝子の転写を活性化することが推測された.また,Aux/IAAファミリーは、オーキシンによる分解制御を受けることが報告されているため,上記の分子をタンパク質レベルで解析する必要があると考えられた.そこで,それぞれの分子に特異的な抗体の作成にするため,CsIAA1ならびにCsIAA2に関しては全ORFを,CsARF2ならびにCsARF5に関しては相同性の低いN末端領域と中間領域を独立に,ヒスチジンタグ融合タンパク質として発現させ,ウサギに免疫した.抗体が出来次第,これらの分子がペグ形成時にどこで機能しているのか,タンパク質レベルでの発現解析を行う予定である.
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