2004 Fiscal Year Annual Research Report
Nアセチルガラクトサミン4硫酸6硫酸転移酵素により合成される高硫酸化構造の機能
Project/Area Number |
04J04208
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Research Institution | Aichi Medical University |
Principal Investigator |
大竹 しおり 愛知医科大学, 分子医科学研究所, 特別研究員(DC1)
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Keywords | 硫酸転移酵素 / コンドロイチン硫酸 / 非還元末端 / 肥満細胞 |
Research Abstract |
コンドロイチン硫酸E(CS-E)などの高硫酸化構造は、粘膜免疫系・神経系・血液凝固系など多彩な生理学的機能が示唆されている。N-アセチルガラクトサミン4-硫酸6-O-硫酸転移酵素(GalNAc4S-6ST)はこれらの高硫酸化構造の合成に関与している。高硫酸化構造の機能を明らかにするために下記の方法によりアプローチしている。 1.GalNAc4S-6ST遺伝子ノックアウト(KO)マウスを作製し個体レベルでの機能解析 KOマウスを作製するために、GalNAc4S-6STの機能ドメインを破壊するようにターゲティングベクターを作製し、ES細胞に遺伝子導入した。相同組換えを起こしたクローンをPCRにより選択し、サザン解析により相同組換えを確認した。現在、キメラマウスの作製を業者に委託している。 2.コンドロイチン硫酸(CS)の非還元末端に存在する高硫酸化構造と種々のタンパク質との結合活性の検討 CSの非還元末端に存在する構造と同じ、GalNAc(4SO_4)-GlcA(2^<35>SO_4)-GalNAc(6SO_4)、GalNAc(4,6-bisSO_4)-GlcA(2SO_4)-GalNAc(6SO_4)という2種類のオリゴ糖を調製するために、2OST遺伝子をクローニングし、リコンビナント酵素を調製した。現在、リコンビナント2OSTの基質特異性を調べている。 3.粘膜系肥満細胞におけるCS-Eの役割 粘膜系肥満細胞におけるCS-Eの役割を調べるために、はじめにIL-3により骨髄細胞から分化した肥満細胞(BMMC)を用いて、BMMCにおけるCS-E合成活性を確認し、GalNAc4S-6ST遺伝子の発現を調べた結果、BMMCではGalNAc4S-6ST遺伝子が分化依存的に発現し、CS-E合成に関与していることが明らかになった。今後、RNAi法による発現制御系を確立する予定である。
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Research Products
(1 results)