2005 Fiscal Year Annual Research Report
酵素反応と電気化学を利用した早期ガン診断方法の開発
Project/Area Number |
05J06546
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Research Institution | Kyushu Institute of Technology |
Principal Investigator |
佐藤 しのぶ 九州工業大学, 情報工学部, 特別研究員(PD)
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Keywords | DNA / テロメラーゼ / 電気化学 / 酵素反応 / ガン診断 / フェロセン化ナフタレンジイミド |
Research Abstract |
1 電気化学的インディケータとして申請者らが開発したフェロセン化ナフタレンジイミド誘導体のうち、一種類においてテロメア配列を有する合成オリゴヌクレオチドとの相互作用解析を行った。吸収スペクトル測定により、Scatchard法を用いてヒトテロメアDNAとフェロセン化ナフタレンジイミドとの結合定数の算出を行ったところ、非常に高い結合親和性を示すことが明らかとなった。さらに、円偏光二色性スペクトル測定により、テロメアDNAが電気化学測定条件下では四本鎖構造を形成していることが明らかとなり、四本鎖DNA構造にフェロセン化ナフタレンジイミドが結合していることが示唆された。さらに結合比の算出を行ったところ、Scatchard法、CDスペクトルによるモル比法、QCM法より、テロメア四本鎖構造とフェロセン化ナフタレンジイミドは1:3で結合していることが明らかとなった。 2 合成オリゴヌクレチドを用いて、テロメラーゼにより伸長される前後のプローブDNAを作成し、電気化学的応答に差があるのかどうかの基礎検討を行った。テロメア配列を有するチオール化オリゴヌクレオチドと、テロメア配列を有さないチオール化オリゴヌクレオチドの電流応答を確認したところ、テロメア配列を有する時に大きな電流増加を確認することができた。さらに、サイクリックボルタンメトリー測定による掃引速度依存性では、テロメア配列を有するときのみフェロセン化ナフタレンジイミドが電極表面に吸着していることが示された。 3 実際に、電極上でテロメラーゼによる酵素反応を行い、酵素反応が確実に行えるように、反応条件の検討を行った。検出感度は、既存のテロメラーゼ活性測定と同程度であった。
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Research Products
(3 results)