| Research Abstract |
申請者は,マクロファージ様P388D_1細胞でのザイモザン刺激下のアラキドン酸遊離反応がCa^<2+>依存性のIV型細胞質ホスホリパーゼA_2(cPLA_2)とCa^<2+>非依存性のVI型細胞質PLA_2(iPLA_2)により担われていることを報告した。本研究は,ザイモザン刺激下でのiPLA_2の活性化機構の解明を目的としており,本年度は,プロテインキナーゼC(PKC)およびCa^<2+>がiPLA_2の膜移行に関与する可能性について検索した。
P388D_1細胞をザイモザンで刺激(1時間)すると,アラキドン酸遊離に平行して膜画分中にiPLA_2活性が上昇し,また,本細胞に存在するPKC分子種(α,β,δ,ε,ζ)のうち,ザイモザン刺激によりPKCα,δ,およびεの三種が膜画分へ移行した。PKCの活性化剤であるホルポールエステル(PMA)で前処理したところPKCαおよびδが枯渇され,この条件下ではザイモザン刺激によるiPLA_2の膜移行も抑制された。さらに,ザイモザン刺激下膜画分でのiPLA_2活性の上昇は細胞内Ca^<2+>の除去により抑制された。そこで,iPLA_2の膜移行へのCa^<2+>の関与について,Ca^<2+>イオノホアを用いて検索した結果,Ca^<2+>イオノホア単独でアラキドン酸遊離が誘起され,この遊離はPMAとの併用により促進されたが,いずれの刺激下においても膜画分中でのiPLA_2活性の上昇は見られなかった。従って,ザイモザン刺激下でのiPLA_2の膜移行にはPKCαまたはδおよびCa^<2+>が必須であるが,これらの因子だけでは不十分であり,ザイモザン刺激に特有の細胞応答がiPLA_2の膜移行に関与する可能性が考えられた。
ザイモザンの刺激下ではファゴサイトーシスが誘起され,それ自身が細胞内に取り込まれることから,iPLA_2の膜移行が刺激に伴うファゴソームの形成に依存する可能性を検索した。その結果,ファゴサイトーシスを抑制するサイトカラシンD(アクチンの重合阻害剤)で細胞を前処理したところ,ザイモザン刺激下でのiPLA_2の膜移行およびアラキドン酸遊離は著しく阻害された。
以上の結果から,ザイモザン刺激下でのアラキドン酸遊離の一部を担うiPLA_2は,PKCαまたはδの活性化およびCa^<2+>動員に依存して,ファゴサイトーシスに伴い形成されたファゴソームの膜へ移行し,その水解活性を発揮することが推察された。
|
