2000 Fiscal Year Annual Research Report
ミオシンリン酸化を介した情報伝達系におけるZIPキナーゼの役割解明に関する研究
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12780538
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
堀 麻希 広島大学, 大学院・理学研究科, 助手 (00304395)
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| Keywords | ZIPキナーゼ / ミオシン / 二重リン酸化 / アクチン / 培養細胞 |
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| Research Abstract |
野生型及び不活性型ZIPキナーゼの細胞導入用コンストラクトを作成し、それぞれ培養細胞に導入したところ、以下のような知見を得ることができた。
1.野生型及び不活性型ZIPキナーゼを導入した細胞を免疫沈澱法により回収し、試験管内でミオシンリン酸化活性を調べたところ、野生型にはミオシンを2重リン酸化(19番目のセリン及び18番目のスレオニンの二か所がリン酸化)する活性が見られたが、不活性型には見られなかった。
2.野生型ZIPキナーゼを導入した細胞を2重リン酸化ミオシンを特異的に認識する抗体で蛍光抗体法により観察すると、2重リン酸化ミオシンが著しく増加していることが分かった。しかし、不活性型ZIPキナーゼを導入した細胞では上記のような現象は見られなかった。
3.野生型ZIPキナーゼを導入した細胞では、アクチン繊維の再構築が引き起こされていることが分かった。しかし、不活性型ZIPキナーゼを導入した細胞では上記のような現象は見られなかった。
これらのことから、ZIPキナーゼは細胞内でミオシンの2重リン酸化を誘導することができること、さらに2重リン酸化ミオシンがアクチン繊維の構築に重要な役割を果たしていることを明らかにした。本研究成果は現在国際誌に投稿中である。
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[Publications] Murata-Hori,M.: "Effect of G1 arrest substances on cells in the G1, S and G2 phase of the cell cycle in Tetrahyaena themophila"European.Journal of Protistology. (発表予定). (2000)
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[Publications] Murata-Hori,M.: "A monoclonal antibody raised against an 80-kD subunit of human DNA helicase11"Zoological Science. (発表予定). (2000)
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[Publications] Suizu.F.: "Activation of actin-activated MgATPase activity of myosin11 by phosphorylation with MAPK-activated protein kinase-lb (RSK)"Journal of Biochemistry. 128. 435-440 (2000)
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[Publications] Gerashchenko.B.I.: "Myosin regulatory light chain as a critical substrate of cell death : a hypothesis"Medical Hypotheses. 54. 850-852 (2000)
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[Publications] Hino,M.: "Small heat shock protein(HSP27) associates with tubulin/microtubules in Hela cells"Biochemical and Biophysical Research Communication. 271. 164-169 (2000)
