家族性乳癌原因遺伝子Brca2の欠損細胞株作成によるBrca2の機能解析-乳癌由来変異Brca2分子の機能評価システムの構築-

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12877026
• Research Institution: Kawasaki Medical School
• Principal Investigator: 高田 穣 川崎医科大学, 医学部, 教授 (30281728)
• Keywords: BRCA2 / 相同DNA組み換え / 家族性乳ガン

Research Abstract

様々な状況証拠から、BRCA2の変異によってHRの異常が起こっていることが推定されている。本研究ではまず、ニワトリBRCA2の全長cDNAのクローニングを行った。ヒトBRCA2の部分配列をプローブとしてストリンジェンシーを下げたハイブリでニワトリライブラリーをスクリーニングし、N末、C末のcDNAクローンを得た。さらにその中間に6kb程度の不明部分があったので、そこはN末、C末の既知配列からプライマーをデザインしてPCRし、ニワトリcDNAの中間部分を得た。現在ドラフトシーケンスは終了し、さらに確認のシーケンスを行っている。ヒトのBRCA2とはかなりダイバージした部分、良く保存された部分も見られ、機能上重要な部分が浮かび上がってきそうである。さらに、ゲノムクローンを分離し、ターゲティングベクターを作成し、DT40にトランスフエクトしてクロンをサザンで選別し、ヘテロのクローンを得た。このヘテロヒトBRCA2を発現させてウェスタンを行って確認しようとしている。BRCA2が巨大なタンパクであるためか、ウェスタンブロットがなかなか成功しない。現在Inducible Cre recombinaseの使用も検討中である。

Research Products

• [Publications] Tokata M: "The Rad51 Paralog Rad 51B Promotes Homologous Recombinational Repair."Mol Cell Biol. 20. 6476-6482 (2000)
• [Publications] Motoda K: "SHP-1/ITIM-independent inhibitory signaling through murine NK cell receptor Ly-49A in a transfected B cell line."Immunology. 100. 370-377 (2000)
• [Publications] Kurosaki T: "Regulation of phosholipase C-γ2 pathway in B cells."Immunol Rev. 176. 19-29 (2000)
• [Publications] Kurosaki T: "B cell-receptors. In Encyclopedia of Life Sciences."Macmillan Reference Limited, Hampshire, England. (in press).
• [Publications] Takata M: "Chromosome instability and defective recombinational repair in knockout mutants of the five Rad51 paralogs."Mol Cell Biol. (in press).
• [Publications] Sonoda E: "Reverse genetic studies of homologous DNA recombination using the chicken B-lymphocyte line, DT40."Phil Trans R Soc Lond B. 356. 111-117 (2001)