2000 Fiscal Year Annual Research Report
GHおよびPRL遺伝子の発現スイッチングを測定するリアルタイムシステムの開発
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12877166
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| Research Institution | Meiji University |
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Principal Investigator |
加藤 幸雄 明治大学, 農学部, 教授 (30114177)
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| Keywords | 下垂体 / 転写調節因子 / ホルモン / 遺伝子発現 / CH / PRL / 組換えDNA |
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| Research Abstract |
以下の成果を得た
1)ウィスターおよびGHを生産するMtT/SからGHおよびPRL遺伝子の転写開始点上流域をクローニングし、全塩基配列の決定をおこない複数箇所の相互の変異を発見した。
2)レポーター遺伝子に分泌型アルカリフォスファターゼ遺伝子を持つ発現ベクターに、上記クローンを連結した。プロラクチン遺伝子については初期のクローンの連結はできず、より短い領域に絞って連結した。
3)発現ベクターを用いて、細胞への遺伝子導入を行った。その結果、GH遺伝子は細胞特異的な発現、すなわちGH遺伝子を発現しないCHOでは発現せず、GHを生産するGH3細胞ではレポーター遺伝子の発現を観察した。
4)一方、PRL遺伝子上流を連結したコンストラクトはCHO細胞で発現しないことは、コントロールに用いた発現ベクターとの比較から確認できたが、遺伝子導入の条件が下垂体由来細胞に合わないのか現在のところ発現を確認できず、条件の検討を行っている。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Chen,L.: "Cytological characterization of a pituitary folliclo-stellate-like cell line, Tpit/F1, with special reference to adenosine triphosphate-mediated neuronal nitric oxide synthase expression and nitric oxide secretion"Endocrinology. 141. 3603-3610 (2000)
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[Publications] Nishida,N.: "Critical role of nitric oxide in expression of porcine LH receptor at transcription and post-transcription levels"Experimental and Clinical Endocrinology and Diabetes. 108. 424-429 (2000)
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[Publications] Nishida,N.: "Transcription facgtor genes, c-fos and c-jun, in developing porcine granulosa cells in vitro"Journa of Reproduction and Development. 46. 167-175 (2000)
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[Publications] Hattori M.: "FSH suppression of nitric oxide synthesis in porcine oocytes"Journa of Molecular Endocrinology. 24. 65-73 (2000)
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[Publications] 加藤幸雄: "成長ホルモン遺伝子とプロラクチン遺伝子の発現スイッチングのリアルタイム測定系の開発"成科学協会研究年報. 23. 167-172 (2000)
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[Publications] Takesue,K.: "Stimulation of nitric oxide synthesis in porcine granulosa cells by phorbol ester"Journa of Reproduction and Development. 47. 1-6 (2001)
