単純ヘルペスウイルスの病原性発現におけるアクセサリー遺伝子の役割

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13226037
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 西山 幸廣 名古屋大学, 大学院・医学研究科, 教授 (60115615)
• Keywords: 単純ヘルペスウィルス / 病原性 / ul56遺伝子 / 膜蛋白質 / アクセサリー遺伝子

Research Abstract

単純ヘルペスウイルス(HSV)は少なくとも74種の遺伝子をコードするが、その半数以上は培養細胞での増殖には必須ではないアクセサリー遺伝子であることが明らかにされている。本研究はHSVの病原性発現におけるアクセサリー遺伝子の役割、作用機構を明らかにしようとするものである。マウスに対する病原性発現におけるUL56の重要性についてはBeckerのグループによる一連の研究があるが、その役割や機能については全く分かっていないといって良い。我々もUL56欠損ウイルスの病原性については、その特性を確認したが、特異抗体、真核発現系などを用いた解析から、この蛋白質が小胞輸送に関わることを示唆する結果を得た。
UL56遺伝子は、塩基配列より235個のアミノ酸からなる蛋白質をコードしていることが予想された。大腸菌における発現系を作製し、精製したGST-UL56融合蛋白質を用いて特異抗体を作製した。この抗体はHSV2型感染細胞の35,34,33,32,31及び30kDa蛋白質と特異的に反応した。Vero細胞でのUL56単独発現では31、30kDaの蛋白質のみを検出した。HSV2型では1型と異なり、開始コドンの10アミノ酸上流部位にATGが存在する。上流部を含む発現系を作製し検討したところ、34,32,31,30 kDa、の4本のバンドが検出された。以上の結果は、上流のATGからも翻訳が開始されていることを示唆するものである。また、蛍光抗体法による観察では感染6時間後より検出され、ゴルジ体のマーカーGolgi58KProteinと共局在した。より感染の後期ではUL56蛋白質は核周囲の部に集積すると同時に、細胞質にも顆粒状に検出された。単独発現では、ゴルジ体への集積像とともに細胞質に顆粒状に分布し、後者はearly endosomeのマーカーEEA1と共局在した。さらに、界面活性剤に対する挙動、sucrose gradient fractionationによる解析の結果から、UL56蛋白質はlipid raftsと会合していることが示唆された。

Research Products

• [Publications] Yamauchi, Y., et al.: "The UL14 protein of herpes simplex virus type2 translocates the minor capsid protein and the DNA chearage and packaging UL33 protein into the nucleus of coexpressing cells"Journal of General Virology. 82. 321-330 (2001)
• [Publications] Zhu, H.Y., et al.: "Identification and characterization of the UL24 gene product of herpes simplex virus type2"Virus Gnenes. 22. 321-327 (2001)
• [Publications] Yamauchi, Y., et al.: "Herpes simplex virus type2 UL34 protein requires UL31 protein for its relocation to the internal nuclear membrane in transfected cells"Journal of General Virology. 82. 1423-1428 (2001)
• [Publications] Inagaki-Ohara, K., et al.: "Effect of deletion of US2 and US3 from herpes simplex virus type2 on immune responses in the murine ragina following intravaginal infection"Vaccine. 20. 98-104 (2001)
• [Publications] Goshima, F., et al.: "The US2 gene product of herpes simplex virus Type2 interacts with cytokeratin 18"Archives of Virology. 146. 2201-2209 (2001)
• [Publications] Koshizuka, T., et al.: "The US11 gene product of herpes simplex virus has intercellular trafficking activity"Biochemical and Biophysical Research Communications. 288. 597-602 (2001)
• [Publications] Takakuwa, H., et al.: "Herpes simplex virus encodes a virion-associated protein which promotes long cellular processes in overexpressing cells"Genes to Cells. 6(11). 955-966 (2001)
• [Publications] Yoshikawa, T., et al.: "Human herpes virus 6 viremia in bone marrow transplant recipients : clinical features and risk factors"Journal of Infectious Disease. (in press). (2002)
• [Publications] Yoshikawa, T., et al.: "Latent infection of human herpes virus6 in astrocytoma cell line and alteration of cytokine synthesis"Journal of Medical Virology. (in press). (2002)
• [Publications] Nishiyama, Y., et al.: "Antiapoptotic protein kinase of herpes simplex virus"Trends in Microbiology. (in press). (2002)
• [Publications] Nozawa, N., et al.: "Identification and characterization of the UL7 gene product of herpes simplex virus type2"Virus Genes. (in press). (2002)