ノックアウトマウスを用いたガラクトース転移酵素遺伝子群の役割分担の解明

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13480280
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 浅野 雅秀 金沢大学, 医学系研究科, 教授 (50251450)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 橋本 憲佳 金沢大学, 医学系研究科, 助手 (50242524)
• Keywords: 糖転移酵素遺伝子 / ガラクトース糖鎖 / ノックアウトマウス / セレクチン / 炎症反応 / 遅延型過敏症

Research Abstract

1)GalT-IIノックアウト(KO)マウスの作製
GalTは7つの遺伝子からなるファミリーを形成していることが明らかとなり,GalT-I遺伝子の機能を相補している第一の侯補は他のGalT遺伝子であると考えられる。そこでGalT-Iと最も相同性が高く,哺乳類に進化してから分岐したと思われるGalT-II遺伝子のKOマウスの作製を進めた。マウス129系統由来のGalT-II染色体DNAを用いてターゲティングベクターを構築した。次にPCRによる相同組換え体のスクリーニングの条件検討を行ったが,検出感度に問題があることがわかり,サザンハイブリダイゼーションでスクリーニングすることにした。ターゲティングベクターをES細胞に導入し,503個のネオマイシン耐性クローンについてサザンハイブリダイゼーションを行ったところ,4つが相同組換え体であることがわかった。このうち正常な核型を示したものについて,キメラマウスの作製を行った。今後,キメラマウスからヘテロマウスを経て,GalT-IIKOマウスの作製を行い,GalT-IIが生合成する糖鎖の機能を解析していく。
(2)GalT-IKOマウスにおける炎症反応の抑制
これまでの研究からGalT-IKOマウスでは,セレクチンのリガンド糖鎖の生合成が障害されていることを明らかにしてきたが,本年度はZymosanの投与による急性炎症反応やmBSAの投与による遅延型過敏症反応について検討を行った。GalT-IKOマウスはコントロールマウスと比較して,これらの炎症反応が有意に抑制されており,セレクチンのリガンド糖鎖の合成不全が原因であることがわかった。しかしこれらの炎症反応はセレクチンのKOマウスほど完全には抑えられなかったので,セレクチンのリガンド糖鎖の生合成には他のGalT遺伝子も関与していることが示唆された。

Research Products

• [Publications] Kurisaki, T., et al.: "Phenotypic analysis of Meltrin α (ADAM12) -deficient mice : Involvement of Meltrin α in adipogenesis and myogenesis"Molecular and Cellular Bioiogy. 23. 55-61 (2003)
• [Publications] Sakamaki, K., et al.: "Ex vivo whole-embryo culture of caspase-8-deficient embryos normalize their aberrant phenotypes in the developing neural tube and heart"Cell Death and Differentiation. 9. 1196-1206 (2002)
• [Publications] Nakae, S. et al.: "Antigen-specific T cell sensitization is impaired in IL-17-deficient mice, causing suppression of allergic cellular and humoral responses"Immunity. 17. 375-387 (2002)
• [Publications] Yamamoto, S. et al.: "Mice deficient in nervous system-specific carbohydrate epitope HNK-1 exhibit impaired synaptic plasticity and spatial learning"Journal of Biological Chemistry. 277. 27227-27231 (2002)