B型肝炎のラミブジン耐性獲得のメカニズムの解析と対策の検討

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13557049
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 茶山 一彰 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (00211376)
• Keywords: lamivudine / YMDD野生株 / YMDD変異株 / peptide nucleic acid / pre-Core / core promoter / adefovir

Research Abstract

平成13年度に構築したlight cyclerによる定量系を用いて、平成14年度には、YMDD変異株出現例と非出現例で、lamivudine投与早期におけるウイルス動態について検討を行い、YMDD変異株出現の指標を推定し報告した。平成14年度には、pcptide nucleic acid(PNA)を用いて超高感度にYMDD変異株を検出する系を構築し、検出感度を従来法の10^4倍まで上昇させることを可能にした。この系を用いることで、耐性株出現のより早期発見が可能となり、lamivudine非投与例のHBe抗体陽性B型肝疾患62例中1例(1.6%)で、YMDD変異株(YVDD)が存在することを確認した。またさらなる解析により、未報告の種々のYMDD変異株を同定し報告した。H15年度にはHBe抗原陽性B型肝疾患症例でも同様の検討を行い、未報告のYMDD変異株を同定し報告した。また、lamivudine耐性のYMDD変異株が出現した症例で、pre-Core, core promoter領域の変異、YIDD, YVDD、L528M変異をはじめとするpolymerase領域の変異と病態の関連について検討を開始した。
H14年度には、YMDD野生株と変異株の1.4×HBV DNAのコンストラクトを作成し、培養細胞にtransfectionし、ウイルスの放出、蛋白発現を確認した。H15年度には、1.4×HBV DNAのコンストラクトをHepG2細胞にstable transfectionしHBVを持続高発現する細胞を得た。また、H14年度には、HBV感染細胞系にlamivudineを投与し、YMDD野生株と変異株の薬剤感受性の比較検討を開始し、H15年度には、lamivudine、adefovirなど種々の薬剤の有効浪度をYMDD野生株、変異株別に検討し報告した。また、YMDD野生株と変異株の1.4×HBV DNAコンストラクトをtransfectionし、PNAを用いて、複製されてくるHBVのquasispecicsについて検討し報告した。

Research Products

• [Publications] W.Ohishi, H.Shirakawa, K.Chayama ほか5名: "Identification of Rare polymerase Variants of Hepatitis B Virus Using Two-Stage PCR with Peptide Nucleic Acid Clamping"Journal of Medical Virology. 72・4. 558-565 (2004)
• [Publications] W.Ohishi, K.Chayama: "Rare Quasispecies in the YMDD motif of Hepatitis B Virus Detected by Polymerase Chain Reaction with Peptitde Nucleic Acid Clamping"Intervirology. 46・4. 355-361 (2003)
• [Publications] 大石和佳, 茶山一彰: "Lamivudine耐性ウイバレスとその治療"臨床雑誌内科. 93・3. 491-494 (2004)
• [Publications] 木村そのこ, 大石和佳, 茶山一彰 ほか15名: "B型肝炎に対するラミブジン治療中にみられたHBe抗体価の低下"肝臓. 44・7. 369-370 (2003)
• [Publications] 大石和佳, 茶山一彰: "HBVの変異"臨床医. 29・5. 594-595 (2003)
• [Publications] Chayama K.: "Management of chronic hepatitis C and prevention of hepatocellular carcinoma."Journal of Gastroenterology. 37Supplement13. 69-73 (2002)
• [Publications] K.Kamada, M.Kitamoto, Chayama K.ほか5名: "Combination of transcatheter arterial chemoembolizaiton using cisplatin-lipiodol suspension and percutaneous ethanol injection for treatment of advanced small hepatocellular carcinoma"Am J Surg. 184,3. 284-290 (2002)
• [Publications] M.Sakamoto, S.Tazma, Chayama K: "Less hydrophobic phosphatidylcholine species simptlity piliary vesicle morhology, but induce bile metastability with a broad spectrum of crystal forms"Biochem J. 362,Pt1. 105-112 (2002)
• [Publications] S.Tazuma, T.Nishioka, Chayama K.ほか13名: "Impaired gallbladder mucosal function in aged gallstone patients suppresses gallstione recurrence after successful extracorporeal shockwave lithotripsy"J Gastroenterol Hepatol. 18,2. 157-161 (2003)
• [Publications] J.Tanaka, H.Kumada, K.Ikeda, Chayama K.ほか7名: "Natural histories of hepatitis C virus infection in men and women simulated by the markov model"Journal of medical virology. 70,3. 378-386 (2003)
• [Publications] W.Ohishi, M.Kitamoto, Chayama K.ほか7名: "Impact of aging on the development of hepatocellular carcinoma in patients with hepatitis C virus infection in japan"Scand J Gatroenterol. 38,8. 894-900 (2003)
• [Publications] K.Nakai, S.Tazuma, T.Nishioka, Chayama K.: "Inhibition of cholesterol crystallization uder pilirubin deconjugation : partial characterization of mechanisms whereby infected bile accelerates pigment stone formation"Biochem Biophys Acta. 1632,1-3. 48-54 (2003)
• [Publications] T.Kamada, K.Haruma, Chayama K.ほか7名: "Significance of an exaggerated meal-stimulated gastrin response in pathogenesis of Helicobacter pylori-negative duodenal ulcer"Dig Dis Sci. 48,4. 644-651 (2003)
• [Publications] K.Tsuboi, S.Tazuma, H.Ochi, Chayama K.: "Hydrophilic bile salts have a cytoprotective effect against cyclosporine A-induced cholestasis through enhanced canalicular membrane fluidity and transporter activity"Hepatol Res. 25,1. 38-47 (2003)
• [Publications] W.Ohishi, Chayama K.: "Rare quasispecies in the YMDD motif of hepatitis B virus detected b y polymerases chain reaction with paptide nucleic acid clamping"Intervirology. 46,6. 355-361 (2003)
• [Publications] 茶山一彰: "B型・C型肝炎の病態と治療"犬山シンポジウム記録刊行会. 6 (2003)