すべての皮膚自己抗原の生化学的検出による自己免疫性水疱症診断システムの確立

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13557072
• Research Institution: KURUME UNIVERSITY
• Principal Investigator: 橋本 隆 久留米大学, 医学部, 教授 (20129597)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 名嘉眞 武国 久留米大学, 医学部, 講師 (50221453) ; 安元 慎一郎 久留米大学, 医学部, 助教授 (10220162) ; 楠原 正洋 久留米大学, 医学部, 講師 (40195441) ; 井上 光世 久留米大学, 医学部, 講師 (10232563)
• Keywords: ケラチノサイト / デスモソーム / ヘミデスモソーム / 天疱瘡 / 類天疱瘡 / 免疫ブロット法 / ELISA法 / 免疫電顕

Research Abstract

VII型コラーゲンのNC1部位とNC2部位のリコンビナント蛋白を用いた免疫ブロット法で、多くの後天性表皮水疱症患者血清がNC1部位と反応し、少ないながら、一部の後天性表皮水疱症患者血清はNC2部位と反応することを示した。さらに免疫電顕により、NC1部位は基底番に存在するのに対して、NC2部位は基底番から約300nm下方に存在することを示した。
バキュロウイルス発現系を用いてデスモコリン(Dsc)1-3のバキュロ蛋白を作成し、それを用いたELISA法を確立した。この検索で、一部の特殊な天疱瘡血清はDsc1-3の各蛋白と反応することを証明した。
新しい自己免疫性水疱症である抗p200類天疱瘡の抗原は未同定であるが、VII型コラーゲンを欠損した栄養障害性先天性表皮水疱症患者の皮膚切片を用いた蛍光抗体法で、抗p200類天疱瘡血清が、基底膜に反応したことから、抗p200類天疱瘡抗原はVII型コラーゲンとは異なることが示唆された。
抗BP180瘢痕性類天疱瘡の抗原の詳細な検討のために、BP180の各種のリコンビナント蛋白を作成して免疫ブロット法で検索した。その結果、BP180の最もC末端の100アミノ酸部位に主要なエピトープが存在することを示した。
抗ラミニン5瘢痕性類天疱瘡の診断に培養ケラチノサイトの培養から精製したラミニン5を用いた免疫ブロット法を確立した。また、主として、alpha 3 subunitに反応したが、beta 3 subunitやgamma 2 subunitに反応する血清もあることが示された。さらに、alpha 3 subunitのG domainの各種のリコンビナント蛋白を作成して、免疫ブロット法で検索した結果、今までの報告とは異なり、抗ラミニン5瘢痕性類天疱瘡血清はalpha 3 subunitのG domainには反応しないことが示唆された。

Research Products

• [Publications] Lee JB, Liu Y, Hashimoto T: "Cicatricial pemphigoid sera specifically react with the most C-terminal portion of BP180"J Dermatol Sci. 32(1). 59-64 (2003)
• [Publications] Liu Y, Shimizu H, Hashimoto T: "Immunofluorescence studies using skin section of recessive dystrophic epidermolysis bullosa patients indicated that the antigen of anti-p200 pemphigoid is not a fragment of type VII collagen"J Dermatol Sci. 32(2). 125-129 (2003)
• [Publications] Hisamatsu Y, Nishiyama T, Amano S, Matsui C, Ghohestani: "Usefulness of immunoblotting using purified laminin 5 in the diagnosis of anti-laminin 5 cicatricial pemphigoid"J Dermatol Sci. 33(2). 113-119 (2003)
• [Publications] Futei Y, Amagai M, Hashimoto T, Nishikawa T: "Conformational epitope mapping and IgG subclass distribution of desmoglein 3 in paraneoplastic pemphigus"J Am Acad Dermatol. 49(6). 1023-1028 (2003)
• [Publications] Shimanovich I, Hirako Y, Sitaru C, Hashimoto T, Brocker: "The autoantigen of anti-p200 pemphigoid is an acidic noncollagenous N-linked glycoprotein of the cutaneous basement membrane"J Invest Dermatol. 121(6). 1402-1408 (2003)
• [Publications] Ishii N, Ishida-Yamamoto A, Hashimoto T: "Immunolocalization of target autoantigens in IgA pemphigus"Clin Exp Dermatol. 29(1). 62-66 (2004)
• [Publications] 橋本 隆: "図解皮膚科学テキスト"中外医学社. 235 (2003)