2001 Fiscal Year Annual Research Report

クロマチンを介した遺伝子発現抑制機構:アクチン関連タンパク質Arp6複合体の解析

Research Project

Project/Area Number	13660076
Research Institution	Tohoku University
Principal Investigator	原田昌彦東北大学, 大学院・農学研究科, 助手 (70218642)
Keywords	アクチン関連タンパク質 / クロマチン / 遺伝子発現制御 / クロマチンリモデリング / ヘテロクロマチシ / タンパク質複合体
Research Abstract	本年度は、出芽酵母ArP6について、核内での局在性を詳しく解析すると共に、これらを含む複合体を精製、解析することにより、Arp6がクロマチンレベルで遺伝子発現抑制を引き起こす分子メカニズムを明らかにすることを試みた。His6タグとFLAGタグを付加し.た出芽酵母Arp6をコードするプラスミドを、出芽酵母ゲノムのARP6遺伝子を破壊した酵母株に導入、発現した。酵母細胞から核タンパクを調製し、Ni-NTAカラムや抗FLAG抗体カラムなどを用いてArp6複合体を精製した。精製した複合体にはArp6と共に精製されるタンパク質が存在しており、これがArp6複合体の構成因子と考えられたので、今後さらに解析をすすめる。またタグを付加した出芽酵母Arp6を大腸菌で発現、精製し、これらをウサギに免疫することによりポリクローナル抗体を作成した。これらの抗体で出芽酵母を抗体染色し、Arp6が核内に局在することを示した。ヘテロクロマチン形成とArp6との関係が既に遺伝学的な解析により示されていたが、抗Arp6抗体を用いたChromatin immunoprecipitation assay(ChIP法)により、Arp6がヘテロクロマチン領域に結合して存在することが示された。また、ARPには機能する際に核マトリクスとの結合性が変化するものも知られている。ヒトArp6とをHeLa細胞で発現させ、核マトリックスを調製したところ、Arp6は核マトリックスに結合することが示された。出芽酵母を用いた解析は、この分野での技術、経験のあるWintersbergerと相互に研究室を訪問して共同で行った。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Kuroda, Y. et al.: "Absence of Z-chromosome inactivation for five genes in male chickens"Chromosome Res.. 9. 457-467 (2001)
[Publications] Kato, M. et al.: "Novel actin-related proteins in vertebrates : similarities of structure and expression pattern to Arp6 localized on Drosophila heterochromatin"Gene. 268. 133-140 (2001)
[Publications] Niimi, A. et al.: "Co-localization of chicken DNA topoisomeraseIIα, but not β, with sites of DNA replication and possible involvement of a C-terminal region of α through its binding to PCNA"Chromosoma (Berl.). 110. 102-114 (2001)
[Publications] Suzuki, H. et al.: "The N-terminal internal region of BLM is required for the formation of dots/rod-like structures which are associated with SUMO-1"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 286. 322-327 (2001)
[Publications] Harata, M.et al.: "Identification of two cDNAs for human actin-related proteins (Arps) that have remarkable similarity to conventional actin"Biochim. Biophys. Acta.. 1522. 130-133 (2001)
[Publications] Harata, M. et al.: "correlation between chromatin association and transcriptional regulation for the Act3p/Arp4 nuclear actin-related protein of Saccharomyces cerevisiae"Nucl. Acids Res.. (in press). (2002)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

クロマチンを介した遺伝子発現抑制機構:アクチン関連タンパク質Arp6複合体の解析

Principal Investigator

原田 昌彦 東北大学, 大学院・農学研究科, 助手 (70218642)

Research Products

[Publications] Kuroda, Y. et al.: "Absence of Z-chromosome inactivation for five genes in male chickens"Chromosome Res.. 9. 457-467 (2001)

[Publications] Kato, M. et al.: "Novel actin-related proteins in vertebrates : similarities of structure and expression pattern to Arp6 localized on Drosophila heterochromatin"Gene. 268. 133-140 (2001)

[Publications] Niimi, A. et al.: "Co-localization of chicken DNA topoisomeraseIIα, but not β, with sites of DNA replication and possible involvement of a C-terminal region of α through its binding to PCNA"Chromosoma (Berl.). 110. 102-114 (2001)

[Publications] Suzuki, H. et al.: "The N-terminal internal region of BLM is required for the formation of dots/rod-like structures which are associated with SUMO-1"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 286. 322-327 (2001)

[Publications] Harata, M.et al.: "Identification of two cDNAs for human actin-related proteins (Arps) that have remarkable similarity to conventional actin"Biochim. Biophys. Acta.. 1522. 130-133 (2001)

[Publications] Harata, M. et al.: "correlation between chromatin association and transcriptional regulation for the Act3p/Arp4 nuclear actin-related protein of Saccharomyces cerevisiae"Nucl. Acids Res.. (in press). (2002)

原田昌彦東北大学, 大学院・農学研究科, 助手 (70218642)