2001 Fiscal Year Annual Research Report

ABCA1蛋白を介した細胞コレステロール輸送の制御

Research Project

Project/Area Number	13770649
Research Category	Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
Research Institution	Kumamoto University
Principal Investigator	袴田秀樹熊本大学, 医学部, 助手 (70284750)
Keywords	ABCA1 / アポリポ蛋白A-1 / cholesterol efflux / コレステロール恒常性
Research Abstract	【1】ヒトABCA1プロモーターのクローニングとその調節機構ヒトABCA1蛋白の発現調節を解析するために、ヒトABCA1遺伝子の転写制御領域(プロモーター領域)をクローニングした。具体的には、5'-RACE(5'-rapid amplification of cDNA end)を用いてABC1 cDNAの5'末端の塩基配列を同定し、その情報を基にhuman genome projectのデータベースからABC1遺伝子の予想プロモーター領域を同定し、PCRによってクローニングした。その結果、(1)ヒトABCA1 cDNAは報告よりも5'末端が455bp長く、その中にKozak'sのルールにより適合したin-frame ATGが見つかった。そのため、蛋白としても60アミノ酸N端が長く、2261残基からなると予想された。(2)転写開始点の5'直上には、弱いながらTATA boxのコンセンサスに類似した配列が見つかり、ABCA1はおそらくTATA-less遺伝子ではないと考えられた。(3)ATGより5'上流の領域には、複数のSP1、AP1の結合配列、SRE(sterol regulatory element)類似配列、NF-κBの認識配列、及びSTATの認識配列などが見いだされ、ABCA1遺伝子の発現は複数の機構によって制御されていると考えられた。(4)5'UTR(5'untranslated region)に2つ、転写開始点よりも5'上流に1つのSNPs(single nucleotide polyporphism)を見いだした(Biochem.Biophys.Res.Commun. 271,451-455)。次に、この領域の変異体を作製してluciferase vectorに組み込んだ後、初代培養ヒト線維芽細胞に感染させ、プロモーター活性を評価した。更に、その活性に変化を与える物質によって、線維芽細胞のcholesterol effluxがどう変化するかを検討した(投稿準備中)。【2】ヒトABCA1蛋白の機能細胞生物学的手法を用いて、アポ蛋白A-1による細胞コレステロール引き抜き現象は、第一段階のリン脂質の引き抜きと、それに引き続くコレステロール引き抜きの、2つの段階から構成されることを示唆した(Biochemistry 39,14113-14120)。現在、cholesterol effluxの機構について、生化学的手法並びに放射標識したコレステロール誘導体を用いて更に詳細に検討している。

Research Products

(4 results)

All Other

All Publications (4 results)

[Publications] Takeshi Biwa et al.: "Sites of action of protein kinase C and phosphatidylinositol 3-kinase are distinct in oxidized low density lipoprotein-induced macrophage proliferation"Journal of Biological Chemistry. 275. 5810-5816 (2000)
[Publications] Clive R.Pullinger et al.: "Analysis of hABC1 Gene 5' End : Additional Peptide Sequence, Promoter Region, and Four Polymorphisms"Biochemical and Biophysical Research Communications. 271. 451-4553 (2000)
[Publications] Nobutaka Ohgami et al.: "Glibenclamide acts as an inhibitor of acyl-CoA : cholesterol acyltransferase enzyme"Biochemical and Biophysical Research Communications. 277. 417-422 (2000)
[Publications] Phoebe E.Fielding et al.: "A two-step mechanism for free cholesterol and phospholipid efflux from human vascular cells to apolipoprotein A-1"Biochemistry. 39. 14113-14120 (2000)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

ABCA1蛋白を介した細胞コレステロール輸送の制御

Principal Investigator

袴田 秀樹 熊本大学, 医学部, 助手 (70284750)

Research Products

[Publications] Takeshi Biwa et al.: "Sites of action of protein kinase C and phosphatidylinositol 3-kinase are distinct in oxidized low density lipoprotein-induced macrophage proliferation"Journal of Biological Chemistry. 275. 5810-5816 (2000)

[Publications] Clive R.Pullinger et al.: "Analysis of hABC1 Gene 5' End : Additional Peptide Sequence, Promoter Region, and Four Polymorphisms"Biochemical and Biophysical Research Communications. 271. 451-4553 (2000)

[Publications] Nobutaka Ohgami et al.: "Glibenclamide acts as an inhibitor of acyl-CoA : cholesterol acyltransferase enzyme"Biochemical and Biophysical Research Communications. 277. 417-422 (2000)

[Publications] Phoebe E.Fielding et al.: "A two-step mechanism for free cholesterol and phospholipid efflux from human vascular cells to apolipoprotein A-1"Biochemistry. 39. 14113-14120 (2000)

袴田秀樹熊本大学, 医学部, 助手 (70284750)