HIV/SIVコレセプター活性を増強する因子の同定

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14657073
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 清水 宣明 群馬大学, 医学部, 講師 (70261831)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 田中 淳 群馬大学, 医学部, 教務員 (20321953) ; 星野 洪郎 群馬大学, 医学部, 講師 (00107434)

Research Abstract

ヒト免疫不全ウイルス(HIV)とサル免疫不全ウイルス(SIV)は、CD4(主レセプター)とコレセプターを介して細胞に感染する。いくつかのG蛋白質共役レセプター(GPCR)がHIV/SIVのコレセプターとして機能する。我々は、リガンド未同定GPCRであるRDC1がHIV/SIVのコレセプターとして機能することを見い出した(Shimizu, N., et al. J.Virology 74:619-626,2000)。また、RDC1のコレセプター活性がマウス白血病ウイルス(MuLV)に関連する因子によって増強される現象を見い出した。HIV感染症ではサイトメガロウイルスやEBウイルスなどの日和見感染が好発する。またヒトの細胞には内在性ウイルス遺伝子が多数存在し、蛋白質の発現も確認されている。CD4とコレセプター以外にHIVの感染効率に影響を与える細胞膜因子の報告はいくつがあるが、ウイルス性因子の関与についての知見はない。本研究の課題であるRDC1のコレセプター活性増強機構の解明は、HIVの個体内感染拡大とウイルス性因子との関係について重要な手がかりが得られると考える。
1.RDC1発現細胞の樹立
発現ベクターpMX-puroにクローニングしたRDC1遺伝子を、レトロウイルス・ベクターを用いてNP-2/CD4細胞に導入し、ピューロマイシン選択により安定発現細胞を樹立した。
2.MuLV感染によるHIV/SIV感受性の上昇
Ecotropicに(同種指向性)あるいはAmphotropic(両種指向性)MuLVの感染によって、RDC1を導入したヒトグリオーマ由来CD4陽性細胞株NP-2/CD4(NP-2/CD4/RDC1)のHIV/SIV感染感受性が上昇することを見いだした。RDC1のコレセプター活性を増強させるMuLV関連因子の存在が示唆された。
3.MuLV遺伝子のクローニング
MuLVのGAG蛋白質、あるいはGAGを構成するマトリクス(CA)、カプシド(CA)、及びヌクレオカプシド(NC)をコードする遺伝子を発現ベクターpCX-bsrにクローニングし、レトロウイルス・ベクターを用いてNP-2/CD4/RDC1細胞に導入した。
4.MuLV遺伝子発現NP-2/CD4/RDC1細胞のHIV/SIV感受性
GAGあるいはGAG関連蛋白質を発現させても、NP-2/CD4/RDC1細胞のHIV/SIV感染感受性は上昇しなかった。GAGを構成するその他の蛋白質、あるいはGAG以外の遺伝子産物がNP-CD4/RDC1細胞のHIV/SIV感染感受性の上昇に関与する可能性が示唆された。次年度においては、それらの遺伝子を発現ベクターにクローニングしてNP-2/CD4/RDC1細胞に導入し、HIV/SIV感染感受性の上昇に関与する因子の同定を試みる。