分裂酵母を用いた放射線誘発ゲノム不安定性の研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15651017
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 丹羽 太貫 京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (80093293)
• Keywords: DT40 / p53 / S.pombe / ゲノム不安定性誘導 / 放射線 / 遅延突然変異

Research Abstract

DT40細胞におけるミニサテライト配列は、この細胞がp53欠損をもっているため、放射線での突然変異が生じにくいことが明らかになり、平成15年半ばでこの細胞を用いた実験を終了した。
酵母はSchizosaccharomyces pombeを用い、新たにUra4遺伝子のなかに部分重複をつくってその間にKan遺伝子を挟み込んだ相同組換え突然変異検出系の作成を試みた。この株では、通常の条件でG418耐性でUra^-の表現型を示すが、重複部分が相同組換えで突然変異を起こすとG418感受性でUra^+の表現型となることが期待できる。作成した株は、部分重複が100塩基対から300塩基対に増えるに従って、自然復帰突然変異の頻度が上昇した。そして実験には重複が200塩基対と300塩基対のものを用いた。これらの株に放射線を照射すると、線量依存的に復帰突然変異頻度が上昇する。この上昇は、酵母の生存率がそれほど低下しない200Gy程度の線量で十分観察された。またこの復帰突然変異の頻度上昇がどれほど継続して見られるかをしらべたところ、照射後6回から10回の細胞分裂の間は突然変異頻度が高いまま推移することが明らかになった。これは照射された酵母でゲノム不安定性が遷延し、遅延的に突然変異が生じたことを示している。現在このゲノム不安定性の誘導が放射線のDNA損傷以外にもHO endonucleaseによる2重鎖切断でも誘導されるか否かを見るため、HO endonuclease siteを導入した株を作成している。

Research Products

• [Publications] Satish Kumar Adiga: "Delayed activation of p21 and its protective role in preimplantation stage mouse embryos fertilized with irradiated sperm."(発表予定).
• [Publications] 丹羽太貫: "The D5Mit7 locus on mouse chromosome 5 provides resistance to g-ray induced, but not N-methyl-N-nitrosourea-induced thymic lymphomas."Carcinogenesis. 143-148 (2004)
• [Publications] 丹羽太貫: "Intragenic deletions of Rit1/Bcl11b tumor suppressor gene in g-ray-induced thymic lymphomas and normal thymus caused by V(D)J recombinase activity."Carcinogenesis. 25. 1-7 (2004)
• [Publications] 丹羽太貫: "Induced genomic instability in irradiated germ cells and in the offspring ; reconciling discrepancies among the human and animal studies."Oncogene. 22. 7078-7086 (2003)
• [Publications] 丹羽太貫: "Bcl11b is required for differentiation and survival of ab T lymphocytes."Nature Immunol.. 4. 533-539 (2003)
• [Publications] 丹羽太貫: "Mapping of genetic modifiers of thymic lymphoma development in p53-knockout mice."Oncogene. 1098-1102 (2003)