2003 Fiscal Year Annual Research Report
より迅速で簡便な大腸菌内での組み換え単純ヘルペスウイルス作製法の確立
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15790245
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
田中 道子 国立感染症研究所, 感染病理部, 研究官 (10356248)
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| Keywords | 組み換え単純ヘルペスウイルス / 大腸菌 |
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| Research Abstract |
単純ヘルペスウイルス(HSV)は基礎研究の分野で古くから勢力的に解析が行われ、また近年では遺伝子治療ベクターとして臨床研究の分野でも注目を集めている。何れにおいても第一段階として組み換えウイルスの作製が必須といえる。しかし、従来の組み換えウイルス作成技術は煩雑でありかなりの長期問を要した。本研究の目的は1.HSV研究の壁になっている組み換えウイルス作製法の技術の改変法の確立。2.1.で確立した手法に基づき未だ明らかにされていない、または機能の解明されていない遺伝子を解析しその生物学的機能を明らかにする。3.最終目標としては1,2を元に安全で治療効果の高い有用なHSV遺伝子治療ベクターを開発することにある。
本研究の今年度の成果は以下のようである。
1.大腸菌内での組み換えウイルス遺伝子作製法の確立。
従来のRecA法、RecET法に改変及びこれらを組み合わせることで、新たな大腸菌内での組み換えウイルスゲノム作製法を確立した。この方法を用いることで、あらゆる変異(削除、挿入、点変異)が従来よりも低costで導入可能となった。
2.新たな変異HSVの作製及びその生物学的機能の解析
具体的には、HSVの病原性に深く関与することが示唆され、かつ全てのヘルペスウイルスに共通するウイルス特異的酵素であるHSV UL13遺伝子を標的とし、特定部位に1アミノ酸置換を導入した変異HSVの作製に成功した。現在、この変異ウイルスについて増殖能等の生物学的機能解析を行っている。
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[Publications] Michiko Tanaka, Hiroyuki Kagawa, Yuji Yamanashi, Tetsutaro Sata, Yasushi Kawaguchi: "Construction of an excisable bacterial artificial chromosome containing a full-length infectious clone of herpes simplex virus type 1 : viruses reconstituted from the clone exhibit wild-type properties in vitro and in vivo"Journal of Virology. Vol.77(2). 1382-1391 (2003)
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[Publications] Michiko Tanaka, Hiroshi Kodaira, Yukihiro Nishiyama, Tetsutaro Sata, Yasushi Kawaguchi: "Construction of recombinant herpes simplex virus type I expressing green fluorescent protein without loss of any viral genes"Microbes and Infection. (In press).
