2016 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of TCR signaling dependent mDia activation molecular mechanism
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15K18986
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
Thumkeo Dean 京都大学, 医学研究科, 特定准教授 (40372594)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | T細胞 / 免疫抑制剤 / アクチン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
T細胞は獲得免疫の要であるが、T細胞の発生及び活性化にはTCRシグナルが不可欠である。しかし、その分子作用メカニズムについては不明な点が多い。申請者はこれまで、アクチン重合因子mDia1/3二重欠損マウスを用いることにより、TCRシグナルにはmDiaが促進的に働くことを見い出してきた。本研究では、さらにmDia DKOのT前駆細胞や末梢T細胞を用いて、TCRシグナル伝達におけるmDiaの分子作用機序を解析し、TCRシグナル伝達を分子レベルで包括的に理解することを目指した。昨年度までは、抗原提示細胞に模した脂質二重膜を用いて、T前駆細胞のTCR刺激を行い、全反射顕微鏡によるTCRマイクロクラスターの分子イメージングを行った。その結果、mDia1/3の二重欠損はTCR刺激依存的TCRマイクロクラスターの形成に影響しないものの、その動きを阻害することが分かった。さらに、F-actinの蛍光標識であるEGFP-lifeactを細胞に導入し、TCRマイクロクラスターと同時イメージングを行った結果、コントロール細胞で見られるTCRミクロクラスターとF-actinの連動が著しく阻害されていることを見いだした。本年度はさらに、Tamoxifen誘導による時期特異的遺伝子欠損システムの確立に成功し、それを用いた成熟末梢T細胞におけるmDiaの機能解析を行った。さらには、EGFPmDia3を発現させたT細胞を用いて、TCR刺激依存的なmDia3動態を可視化し、mDiaが細胞内においてどこに局在し、どのようにF-actinと相互作用するのを明らかにした。以上のことから、mDiaは細胞骨格アクチンを介してTCRシグナルに関わっていることが明らかになった。
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[Journal Article] Constitutive activation of DIA1 (DIAPH1) via C-terminal truncation causes human sensorineural hearing loss2016
Author(s)
Ueyama T, Ninoyu Y, Nishio S, Miyoshi T, Torii H, Nishimura K, Sugahara K, Sakata H, Thumkeo D, Sakaguchi H, Watanabe N, Usami S, Saito N, Kitajiri S
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Journal Title
EMBO Molecular Medicine
Volume: 8
Pages: 1310-1324
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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