2006 Fiscal Year Annual Research Report
核小体分子の発現・機能解析による正常および白血病幹細胞の未分化性維持機構の解明
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18390281
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
平尾 敦 金沢大学, がん研究所, 教授 (90343350)
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| Keywords | 造血幹細胞 / 核小体 / 細胞分化 |
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| Research Abstract |
本研究においては、正常造血幹細胞と白血病幹細胞の共通性を解明するアプローチとして、核小体に焦点を当てて研究を進めた。細胞周期上GO期にある造血幹細胞に特異的に発現する分子を探索した結果、Nucleosteminという分子を特定した。本分子のポリクローナル抗体を作成し、Nucleostemin発現パターンを検討した。既報のごとく、作製した抗体によって、本分子は胚性幹細胞(ES)の核小体に局在していること、他の核小体蛋白であるNucleolin, Nucleophosminと同様の局在していることを確認した。Nucleosteminは、CD34陰性KSLあるいはSP-KSLのような未分化な造血幹細胞に高く発現が認められ、核内で特徴的な染色パターンを示すことが観察された。一方、前駆細胞集団、分化集団においては、その発現が低下していることが判明した。ES細胞においても、LIFを除去し、レチノイン酸処理によって分化させると、その発現が低下し、本分子の発現未分化との相関は、他の組織においても共通した現象であることが示唆された。Nucleostemin蛋白の局在は細胞表面に認められないことから、転写レベルで同定できる実験系が必要である。そこで幹細胞集団の同定を目的とし、本分子の転写調節領域の特定に取り組んだ。まず、本分子のゲノムから、エクソン1を含めた上流領域を得、転写活性を検討した。その結果、約10Kb中に、高い転写活性が存在することがルシフェラーゼ法により判明した。さらにGFPを用いたレポーターシステムを構築し、ES細胞に導入したところ、未分化状態では強く蛍光を発色するのに対して、分化するとその発色が低下し、分化の程度を反映することが明らかになった。
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