2019 Fiscal Year Research-status Report
エクソソームを介したウシ子宮内膜と栄養膜の細胞間クロストーク
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18K05989
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| Research Institution | Iwate University |
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Principal Investigator |
木崎 景一郎 岩手大学, 農学部, 教授 (40337994)
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2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | マイクロRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
令和元年度は、前年度に引き続き、妊娠関連糖タンパク質（PAG）ファミリーのPAG1に着目して、栄養膜特異的マイクロRNA（miRNA）による制御を検証するとともに、PAG2及び胎盤性ラクトゲン（CSH2）についても検討を加えた。
昨年度の結果から、miR-2328-3pがPAG1 mRNAの3’非翻訳領域に結合する可能性が示されたが、さらに解析を進めたところ、miR-2305は翻訳領域に結合する可能性がわかった。PAGを発現するウシ栄養膜細胞系BT-Cに合成miRNA配列を導入し、PAGタンパク質の産生に及ぼす影響を検討しようとしたが、BT-C細胞への遺伝子導入により細胞が死滅したため、合成miRNAの効果を判定することができなかった。そこで、PAG1を強制発現させたヒト胎児腎細胞293に合成miR-2305 mimicを導入し、PAG1発現への影響を検討した。導入したmiR-2305 mimic量を定量したところ、mimic導入群においてmiR-2305含有量は有意に高値を示したことから、miRNA導入は確認された。しかし、PAG1タンパク質量を調べたところ、mimic導入群と非導入群間で差は認められなかった。強制発現ベクターを用いた実験系ではプロモーター活性が高く導入遺伝子の転写活性が強いため、miRNAの効果を検出できなかった可能性が考えられる。
PAG2及びCSH2についても、昨年度と同様に発現動態を調べ、miR-2328-3p及びmiR-2305と比較した。ウシ子宮内膜・胎盤組織中のPAG2及びCSH2の発現動態は、miR-2328-3p及びmiR-2305とは対照的に妊娠に伴い発現が増加する傾向がみられ、有意な負の相関が認められたことから、両miRNAがPAG2及びCSH2 mRNAに結合することによって、各タンパク質の発現を調節している可能性が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
栄養膜細胞系への合成miRNA mimicの導入実験では、導入したmimicの影響は確認できなかったが、手法としてはほぼ確立できたため、導入条件の変更や他の候補miRNAに切り替えて進めることが可能となった。また、他の標的遺伝子（PAG2及びCSH2）も候補として示されたとから、多面的に検証が可能となった。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、培養細胞への合成miRNA mimic導入条件の改良を引き続いて進めるとともに、他標的遺伝子への影響についても検討を加える。さらに、本研究で抽出した栄養膜特異的miRNAの全身組織における発現分布などについても検証を加え、対象としたmiRNAの生理的役割についても考察を加える。
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| Causes of Carryover |
今年度の培養細胞への合成miRNA mimic導入実験において、標的タンパク質の産生が影響を受けなかったことから、合成miRNA mimic導入細胞における網羅的遺伝子発現解析を実施しなかったため、次年度使用が生じた。令和2年度に実施予定である。
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