2008 Fiscal Year Annual Research Report
哺乳類トランスゴルジ網およびエンドソームにおける分子選別の時空間解析
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19590193
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| Research Institution | Fukushima Medical University |
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Principal Investigator |
和栗 聡 Fukushima Medical University, 医学部, 教授 (30244908)
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| Keywords | GGA / mannose 6-phosphate receptor / RNAi / transGolgi Netowork / endosome |
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| Research Abstract |
単量体クラスリンアダプター、GGA (Golgi-localizing, gamma-adaptin ear homology, ADP-ribosylation factor-binding protein)は、リソソーム酵素の選別受容体mannose6-phosphate receptor (MPR)のトランスゴルジ網(TGN)-エンドソーム間の輸送を制御すると考えられているが、哺乳動物では構造、機能的に類似した3種類のGGA遺伝子(GGA1,2及び3)が発現しており、それらの細胞内における作用部位や作用機序の詳細は不明な点が多い。本課題では、GGAの生理機能を明らかにする目的でGFPにMPRの膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを融合させたキメラタンパク質(GFP-MPRtail)を安定に発現する細胞株を用い、同細胞でRNAi法によりGGAをノックダウンし、GFP-MPRtailの細胞内分布、動態変化の観察を行った。その結果、GGA2及び3のノックダウンにより細胞内のGFP-MPRtail量が増加するとともに、GFP陽性の粗大顆粒が出現した。免疫電顕により、GFP-MPRtailのクラスリン被覆小胞への局在が減弱し、光顕で観察された顆粒が小胞あるいは小管構造からなる膜構造であることが示唆された。これらの結果より、GGA3がMPRの細胞内における選別及びターンオーバーに関わっており、GGA3の発現低下によりGFP-MPRtailが本来の輸送ルートをはずれ細胞内に蓄積していることが示唆された。以上の結果は第114回日本解剖学会にて発表した。
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